Получение и очистка общего липидного экстракта

Экстракцию липидов из образцов миокарда проводили по Bligh E., Dyer W.A. [32]. Выбор данного метода для экстракции и очистки липидов был обусловлен его оптимальностью (благодаря поэтапному использованию растворителей с различной степенью полярности) для экстракции липидов из биологических структур, находящихся в водном растворе. Для этого к 1 мл среды инкубации с находящейся в ней навеской ткани добавляли экстрагирующую смесь (хлороформ, метанол в соотношении 1:2 по объему), гомогенизировали и выдерживали не менее 2 ч на холоде, периодически перемешивая. После экстракции осадок тканевых элементов отделяли фильтрованием. Затем добавляли хлороформ (в отношении 2,5:9 к количеству экстрагирующей смеси), смешивали и вносили такой же объем 0,02 % раствора хлорида кальция для удаления нелипидных примесей. Смесь хорошо перемешивали и оставляли стоять в холодильнике на сутки для расслоения фаз. Верхнюю водную фазу декантировали с помощью микродозатора. Полученный общий липидный экстракт использовали для дальнейшего качественного и количественного анализа липидов: брали аликвоты для количественного определения общих липидов –

ОЛ - 0,1 или 0,2 мл.

Оставшийся экстракт выпаривали и использовали для анализа липидных фракций.