 |
Главная Случайная страница Контакты | Мы поможем в написании вашей работы! | |
Дослід 4. Визначення активності ФАД-залежної сукцинат-дегідрогенази – компонента дихального ланцюга мітохондрій
|
|
Принцип методу. Сукцинатдегідрогеназа каталізує дегідрогенізацію сукцинату (бурштинової кислоти), в результаті чого утворюється фумарат (фумарова кислота). Кофактором ферменту є ФАД, який відновлюється в процесі реакції до ФАДН2. Утворений в реакції ФАДН2 відновлює метиленову синьку та перетворює її в безбарвну лейкосполуку.
Матеріальне забезпечення: фосфатний буфер рН 7,4, розчин бурштинової кислоти, розчин метиленової синьки, суспензія мітохондрій, 0,1 М розчин H2SO4, термостат, штатив із пробірками, піпетки.
Хід роботи. Дві пробірки – контрольну та дослідну заповнюють реактивами згідно таблиці:
| Вміст пробірок | Пробірка | |
| Контрольна | Дослідна | |
| Фосфатний буфер, рН = 7,4, мл | 1,0 | 1,0 |
| Розчин бурштинової кислоти, мл | 1,0 | 1,0 |
| Суспензія мітохондрій, мл | – | 0,5 |
| Суспензія мітохондрій після кип’ятіння, мл | 0,5 | – |
| Метиленова синька, мл | 0,5 | 0,5 |
| Інкубація в термостаті при 37оС | ||
| Результати: інтенсивність знебарвлення метиленової синьки (колір розчину) |
За результатами проведеного експерименту зробити висновки.
Клініко-діагностичне значення. Багато речовин, у тому числі і лікарські засоби, можуть змінювати енергетику клітин, інтенсивність окислювального фосфорилування – утворення АТФ. Їх можна поділити на активатори та інгібітори енергетичного обміну. До активаторів належать кислоти циклу Кребса (лимонна, яблучна, бурштинова) та низка інших сполук (глюкоза, амінокислоти тощо), тому вони знайшли застосування у медичній практиці.
Лимонну кислоту у вигляді солей (цитрат натрію) використовують як засіб, що запобігає згортанню крові та може входити до складу деяких ліків.
Дата публикования: 2014-11-18; Прочитано: 633 | Нарушение авторского права страницы | Мы поможем в написании вашей работы!
