Картирование и секвенирование

Ферментативное секвенирование ДНК. Сэнгер, 1977. Субклонир фрагм ДНК из космид → спец векторы→ послед нуклеотидов. Способы визуализайии: меченые праймеры, цепи ДНК, терминалов. В каждой проб отнош dNTP такое, чтобы синтезир набор фрагментов включ в каждую позиц дан осн. Фрагм в геле по длинне.

Генетич картирование - поиск места располож в геноме гена или генетического маркера на основ его наслед в родословных по косегрегации генами/маркерами известной локализации. Непрямой метод, т.к. основ на корреляции между призн и уч хр при передаче в ряду поколений или клеточных клонов. Анализ генетического сцепления гена или маркера неизв локализ с геном или маркером изв локализ. Генетич расст между сцепл маркерами измер 1% рекомбинации = 1 сМ. По частоте рекомбинации судят о расстоянии между маркерами.

Картирование и секвенирование Одной из основных целей исследования генома человека является построение его точной и подробной карты. Генетическая карта - это схема, описывающая порядок расположения на хромосоме генов и других генетических маркеров, а также расстояние между ними. Карты генома, как и географические карты, можно строить в разном масштабе, т.е. с разным уровнем разрешения. Примером самой мелкомасштабной карты - карты с минимумом деталей - является картина дифференциального окрашивания хромосом. Максимально возможный уровень разрешения на генетической карте - один нуклеотид. То есть, самой крупномасштабной картой генома является полная последовательность нуклеотидов. Карты генома принято подразделять на карты генетического сцепления (собственно генетические карты) и физические карты. Различаются они методами построения. Карты генетического сцепления строятся на основе анализа данных по наследованию гена или маркера в ряду поколений, физические карты основываются на прямом исследовании носителей генетической информации - хромосом, генов, молекул ДНК. Упоминавшееся выше сегментирование хромосом с помощью дифференциальной окраски - пример физического картирования. Существуют и другие типы физических карт - рестрик-ционная карта, карта контиг и т.д. К настоящему времени для всех хромосом человека построены мелкомасштабные генетические карты с расстоянием между соседними маркерами в 7-10 миллионов п.о. (мегабаз). Для некоторых районов генома, представляющих особый интерес, имеются и подробные физические карты. Всего сейчас известна локализация около 5,5 тысяч генов. Несколько лет назад была сформирована международная генетическая программа "Геном человека", которая объединила усилия ученых, работающих в области картирования генов человека. Конечной целью этого проекта является построение подробной карты генома. Для достижения этой цели предстоит построить детальную генетическую карту (с уровнем разрешения в 2 Мб), затем создать физические карты фрагментов генома с разрешением до 5 Кб, и наконец, полностью секвенировать всю ДНК генома человека. Создание такой карты генома может совершить настоящую революцию в познании биологии человека. Данные, полученные при картировании и полном секвенировании генома, позволят выявить все гены человека, помогут определить их функции и разработать средства для коррекции наследственных нарушений.