Определение осмотической устойчивости эритроцитов

Основано на оценке степени гемолиза в гипотонических растворах хлорида натрия, в которых происходит набухание и гемолиз эритроцитов. Выделяют 2 вида осмотической устойчивости эритроцитов: максимальная 0,28-0,32 % NaCl (разрушаются молодые эритроциты); минимальная 0,44-0,48 % NaCl (разрушаются старые эритроциты). Если границы сдвигаются в сторону максимальной устойчивости, то в периферической крови преобладают молодые эритроциты; если к минимальной устойчивости, то старые (кроветворение ослаблено).

ЦЕЛЬ: освоить методику определения осмотической устойчивости эритроцитов.

ОСНАЩЕНИЕ: дефибринированная кровь, штатив для пробирок, 10 пробирок, восковой карандаш, пипетка, стеклянная палочка, растворы хлорида натрия убывающей концентрации.

ХОД РАБОТЫ: предварительно готовят рабочие растворы натрия хлорида различной концентрации от 0,15 до 0,6%. Рабочие растворы натрия хлорида разливают по 5 мл в 10 центрифужных пробирок. В каждую добавляют по 3-5 капель дефибринированной крови. Пробирки оставляют на 1 час при комнатной температуре, а затем центрифугируют 5 мин при 2000 об/мин. Надосадочную жидкость из каждой пробирки исследуют на фотоэлектроколориметре. Определяют процент (степень) гемолиза, приняв за 100% гемолиз в пробирке с 0,15% раствором натрия хлорида. Гемолиз можно определять и визуально по цвету надосадочной жидкости. При его отсутствии наблюдается бесцветный раствор и большое количество осадка. При частичном гемолизе - появление окраски надосадочной жидкости (розовение) и уменьшение осадка. При полном гемолизе эритроцитов - интенсивная красно-лаковая окраска надосадочной жидкости и отсутствие осадка.

Частичный гемолиз характеризуется окрашиванием раствора и появлением осадка неразрушенных эритроцитов. Начало гемолиза (минимальная его степень) определяется по легкому порозовению (при визуальном определении гемолиза количество рабочего раствора в пробирке должно быть меньше 1,0 мл). Бесцветный раствор и большое количество осадка свидетельствуют об отсутствии гемолиза.

Определить, при какой концентрации раствора хлорида натрия наступает гемолиз и сделать вывод об осмотической устойчивости исследованных эритроцитов.