Определение количества белка в ликворе с сульфосалициловой кислотой

Принцип. Сульфосалициловая кислота вызывает коагуляцию белка с образованием мутности, интенсивность которой пропорциональна концентрации белка.

Реактивы. 1. 6% раствор сульфосалициловой кислоты (ССК). 2. 14% раствор сульфата натрия (безводного). 3. Рабочий раствор – готовят перед употреблением путем смешивания равных объемов реактивов 1 и 2. 4. 0,9% раствор хлорида натрия. 5. 1% раствор альбумина для построения калибровочного графика.

Специальное оборудование: фотоэлектроколориметр.

Ход исследования. В пробирку (опыт) наливают 5мл свежеприготовленного рабочего раствора и 0,5мл ликвора. В другую пробирку (контроль) наливают 5мл 0,9% раствора хлорида натрия и 0,5 мл ликвора. Тщательно перемешивают содержимое обеих пробирок. Через 10 минут измеряют интенсивность помутнения на ФЭКе при длине волны 410-480нм (сине-фиолетовый светофильтр) в кювете 10мм, против содержимого контрольной пробирки. Расчет количества белка ведут по калибровочному графику.

Построение калибровочного графика. Из калибровочного раствора готовят разведения и обрабатывают их как опытную пробу. В 5 пробирок наливают соответственно 0,05; 0,1; 0,2; 0,5 и 1мл раствора альбумина и в каждую из них доливают 0,9% NaCl до объема 10мл. Концентрация белка в этих растворах составляет соответственно 0,05; 0,1; 0,2; 0,5 и 1г/л.

Белки спинномозговой жидкости состоят из двух основных фракций: альбуминов и глобулинов. Отношение глобулиновой фракции к альбуминам колеблется в пределах 0,2-0,3 (2:10-3:10). При воспалительных заболеваниях происходит увеличение количества в основном крупнодисперсных белков-глобулинов, что и выявляется глобулиновой реакцией Нонне-Апельта.

Определение глобулинов высаливанием (реакция Нонне-Апельта)

Принцип. Реакция основана на свойстве солей в определенной концентрации (полунасыщенного раствора сульфата аммония) осаждать избирательно глобулины.

Реактив: насыщенный раствор сернокислого аммония. 85г соли растворяют в 100мл воды при кипячении, полученный раствор выдерживают 48 часов при комнатной температуре и фильтруют. Реакция раствора нейтральная (рН 7,0-7,1).

Ход исследования. В одну пробирку (опыт) вносят 0,5мл ликвора и 0,5мл насыщенного раствора сульфата аммония, перемешивают. Получается полунасыщенный раствор сернокислого аммония. В другую пробирку (контроль) наливают 1мл дистиллированной воды. Сравнивают прозрачность содержимого опытной и контрольной пробирок на черном фоне.

Оценка результатов. Проба считается положительной, если помутнение в опытной пробирке появится в течение 3-х минут. Позднее помутнение может произойти и в нормальной спинномозговой жидкости. Результаты пробы оцениваются по системе четырех плюсов так же, как проба Панди.

Реакция позволяет отличить нормальное содержание глобулинов в ликворе от патологически увеличенного. Более достоверное представление о содержании глобулинов и их фракций дает электрофорез белков ликвора.

Глюкоза. В норме cодержание глюкозы в ликворе составляет 2,7-4,4 ммоль/л. Для определения глюкозы в ликворе используют те же методы, что и для глюкозы крови (чаще всего глюкозооксидазный, ортотолуидиновый, с помощью полосок ФАН).

Хлориды. В норме содержание хлоридов в ЦСЖ составляет 118-132 ммоль/л. При менингитах (как туберкулезных, так и гнойных) количество глюкозы и хлоридов в ЦСЖ падает.