Реакции с использованием меченых реагентов

К реакциям с использованием меченых реагентов относят реакцию иммунофлюоресценции, иммуноферментный анализ, радиоиммунный анализ, иммуноблоттинг.

- Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) (метод Кунса) основана на использовании АТ, меченных флюорохромами - веществами, светящимися в УФ. Результаты оценивают с помощью люминесцентного микроскопа. Метод позволяет выявлять как бактериальные АГ, так и АТ и применяется для экспресс-диагностики. Различают прямой и непрямой методы РИФ. При прямом методе неизвестный АГ (микроорганизмы, клетки) напрямую взаимодействует с мечеными АТ. В случае положительного результата наблюдается свечение АГ. Непрямой метод РИФ проводят в два этапа. На первом этапе известный АГ взаимодействует с искомыми АТ, на втором - образовавшиеся иммунные комплексы проявляют с помощью меченой антииммуноглобулиновой сыворотки. Результаты оценивают, как и в случае прямого варианта.

- Иммуноферментный анализ (ИФА) - наиболее распространенный современный метод, используемый в микробиологической и иммунологической диагностике. Модификаций ИФА существует очень много, но широко используется его твердофазный неконкурентный вариант. В реакции используют специфические АТ, меченные ферментом. Проявляют реакцию, добавляя субстрат для фермента, а затем - краситель-хромоген. При положительной реакции наблюдается изменение цвета реакционной смеси.

- Радиоиммунологический анализ (РИА) основан на использовании меченных радиоактивными изотопами АГ или АТ. Результат оценивают по уровню радиоактивности образовавшихся иммунных комплексов.

- Иммуноблоттинг основан на сочетании электрофореза и ИФА (или РИФ, РИА). Проводят разделение смеси АГ в электрофорезе, которые затем проявляют АТ, меченными ферментами, изотопами, флюорохромами.

показано 37 из 44

стр. 37

и