Выделение микроорганизмов. Методы выделения чистых культур микроорганизмов. Накопительные культуры и принцип элективности

Проявления жизнедеятельности одной особи ничтожно малы, свойства неуловимы, поэтому объектом изучения в микробиологии служит культура микро-ма, размноженная до миллионов и млрд особей. Поддержание микро-мов в культуре наз культивированием. Некоторые микро-мы образуют колонии, крупные скопления и т д. Такие легко обнаруживаемые микро-мы поддаются прямому выделению. Для них легко подобрать условия, обеспечивающие их рост. Но есть много микро-мов, относящихся к различным физиологическим группам, которые стали доступными для изучения лишь благодаря методу накопительных культур в элективных условиях, разработанному в конце 19 века Виноградским и Бейеринком. Культура, обогащенная одним определенным видом или определенной физиологической группой микро-мов, наз элективной, накопительной или избирательной. Подбирая ряд факторов, создают определенные условия и инокулируют среду смешанной популяцией, какая имеется в природном источнике. Наиболее приспособленный к такой среде микро-изм растет и вытесняет все остальные сопутствующие организмы. Путем многократных пересевов в такую же жидкую среду и посева на твердую среду того же состава можно легко выделить накопленный вид. Получение накопительной культуры – это первый этап на пути выделения чистой культуры – совокупности микро-мов, состоящей из особей одного вида. Ведь если в культуре преобладают клетки одного вида, то из нее легче выделить чистую культуру. Под чистой культурой понимают потомство одной единственной клетки (клон). Получить чистую культуру, с несомненностью доказать ее чистоту и уберечь от загрязняющих организмов - главная задача микробиолога. Чистые культуры микроорганизмов, за редкими исключениями, выделяют на поверхности или внутри твердой питательной среды. Процедура начинается с отделения от клеточной популяции одной - единственной клетки, причем вырастающая из клетки колония тоже должна оставаться изолированной от других клеток и колоний. Аэробные бактерии выделяют по методу Коха - рассеивают суспензию по поверхности среды в чашках Петри или применяют менее трудоемкий метод - размазывают каплю платиновой петлей по агаризованной среде. Анаэробные бактерии суспендируют в расплавленном агаре (45°С) и проводят инкубацию без доступа воздуха. Тщательное отделение одной колонии, повторное суспендирование в жидкой среде и повторное нанесение штриха или разведение в агаре позволяют получать чистые культуры большинства микроорганизмов. Прогресс в технике получения чистых культур микро-мов достигнут путем введения в практику плотных питательных сред. Впервые в 1883 г в лаборатории Коха был применен агар-агар почти идеальное средство для получения твердых сред. При рассеве суспензии накопительной культуры на плотную среду каждая клетка в результате размножения дает видимое невооруженным глазом скопление – колонию. Это потомство одной клетки – клон, клоновая культура, у клеток которой все наследственные признаки одинаковы, т е это генетически однородное потомство. Клоновую культуру можно получить с помощью специальных приборов – микроманипуляторов и микроселекторов или капельным методом Линднера. Популяция клеток одного вида, представленная чистой культурой, состоит из особей, отличающихся друг от друга по активности физиологических и биохимических свойств. Штамм – культура микро-ма одного и того же вида, выделенная из различных природных сред. Получив чистую культуру, необходимо убедиться в ее чистоте и сохранить ее в дальнейшем от загрязнения посторонними микро-мами. Чистую культуру проверяют одновременно несколькими способами: визуально, микроскопически и т д.