Реакция диффузионной преципитации (РДП) в геле

Основана на способности к диффузии в гелях антител и ра­створимых антигенов и отсутствии такой способности у комп­лекса антиген + антитело. Комплекс антиген + антитело образу­ется при контакте диффундирующих навстречу друг другу гомо­логичных антигена и антитела, Он осаждается на месте образо­вания в толще геля в виде полосы преципитации.

Диффузией называется проникновение молекул одного веще­ства между молекулами другого, обусловленное тепловыми дви­жениями молекул. Диффузия возможна в газах, жидкостях, твер­дых телах и гелях. В лабораторной практике очень часто используют ага­ровый гель.

Белки вирусов могут быть и в виде свободных молекул, образующихся в результате деструк­ции вирионов и (или) разрушения клеток, в которых они образовались. Это так называемые растворимые антигены. Они способны к диффу­зии в агаровом геле.

Методика постановки РДП в геле состоит в том, что в слое агарового геля делают несколько углублений (лунок) и в них на­ливают антигены и сыворотки так, чтобы антиген и сыворотка были в соседних лунках. Из лунок антигены и сыворотки начинаютдиффундировать в слой геля. Диффузия направлена во все стороны от каждой лунки. В пространстве между лунками, содержащими ан­тиген и сыворотку, последние диффундируют навстречу друг другу (двойная диффузия и геле). Если они окажутся гомологичными, то образуется комплекс антиген + антитело, который к диффузии не спо­собен вследствие более крупных размеров. Он оседает (преципити-рует) на месте образования в виде беловатой полосы преципитации, которая хорошо заметна на фоне прозрачного геля (рис. 51). Если же диффундирующие друг другу навстречу антиген и сыворотка будут негомологичны, полосы преципитации не образуется.

В ветеринарной практике РДП часто используют для диагностики лейкоза крупного рогатого скота {под названием реакции иммуно-диффузии — РИД) и инфекционной анемии лошадей. В обоих слу­чаях задача сводится к обнаружению в сыворотках крови антител к соответствующим вирусам.

РДП может быть поставлена в чашках Петри, на предметных стек­лах и в капиллярах. Наиболее широкое применение в практике нашел метод постановки РДП на предметных стеклах. Для его осуществле­ния необходимо иметь обезжиренные предметные стекла, градуиро­ванные пипетки на 2—5 мл и пастеровские пипетки; трубку диамет­ром около 5 мм с острыми краями или специальный штамп, влажную камеру, ученическое перо или другой инструмент, пригодный для из­влечения агарового геля из лунки, 1,0—1,5%-ный агар на физрастворе или фосфатном буфере с рН 7,2—7,4, антигены, сыворотки.