Виготовлення мазків з агарової культури

МЕТА: Навчити готувати препарат-мазок з культури, яка виросла на щільному живильному середовищі.

ПРИЗНАЧЕННЯ: Для вивчення морфологічних і тинкторіальних властивостей мікроорганізмів (форми, розташування, колір).

ОСНАЩЕННЯ:

- мікроскоп, імерсійна олія;

- агарова культура;

- 0,9% розчин хлориду натрію;

- спиртівка, сухий спирт, сірники;

- предметні скельця;

- бактеріологічна петля;

- олівець по склу;

- пісочний годинник;

- пінцет;

- барвники: папірці за Синьовим, розчин Люголя, фуксин Прейффера;

- 96% етиловий спирт;

- фільтруючий папір;

- лоток для фарбування;

- вата;

- дезінфікуючий розчин,;

- гумові рукавички, мило, рушник.

ЕТАПИ	ОБГРУНТУВАННЯ
І. ПІДГОТОВЧИЙ ЕТАП 1. Надягніть гумові рукавички. 2. Підготуйте робоче місце. 3. Візьміть знежирене предметне скельце. Підпишіть зі зворотної сторони номер, який вказаний на пробірці з культурою. 4. Пропаліть у полум’ї спиртівки скельце і після охолодження покладіть на половинку чашки Петрі.	Забезпечується стерильність скельця.
ІІ. ВИКОНАННЯ НАВИЧКИ 1. Бактеріологічну петлю, тримаючи як олівець, вертикально у правій руці, пропаліть у полум’ї – спочатку кінець петлі, потім її металеву частину. 2. Не випускаючи петлі, лівою рукою візьміть пробірку (флакон) з 0,9% розчином хлориду натрію, затисніть ватно-марлеву пробку 4-им і 5-им пальцями правої руки, витягніть її, і пронесіть край пробірки через полум’я спиртівки. 3. Тримайте пробірку на відстані 10см від полум’я, не випускаючи пробки. 4. Введіть петлю у пробірку, охолодіть її, торкаючись стінок пробірки. Наберіть краплю фізіологічного розчину.	Стерилізація петлі.     Забезпечується стерильність.
ЕТАПИ	ОБГРУНТУВАННЯ
5. Вийміть петлю. Проведіть край пробірки і пробки через полум’я, закрийте пробірку і поставте у штатив. 6. На центр предметного скельця нанесіть бактеріологічною петлею краплю фізіологічного розчину, щоб вона розтеклася рівномірно. 7. Знову простерилізуйте петлю у полум’ї спиртівки, візьміть у ліву руку пробірку зі скошеним агаром з культурою (за встановленими правилами). 8. Відкрийте пробірку (п.2), охолодіть петлю і наберіть невелику кількість культури. Вийміть бактеріологічну петлю, не торкаючись стінок пробірки, і закрийте пробірку (п.5). 9. Культуру петлею нанесіть біля краплі фізіологічного розчину і поступово розтирайте її по склу, емульгуючи в краплі до отримання тонкого, рівномірного мазка округлої чи овальної форми діаметром 1-1,5 см. 10. Зафламбуйте бактеріологічну петлю і поставте у штатив. 11. Препарат висушіть на повітрі. 12. Зафіксуйте препарат у полум’ї спиртівки. 13. Покладіть препарат на підставку над лотком для фарбування. 14. На препарат пінцетом покладіть папірець по Синьову, потім нанесіть 2-3 краплі води на 1-2 хв. 15. Зніміть пінцетом папірець у лоток. 16. Не промиваючи водою, нанесіть на препарат розчин Люголя на 1 хв. Злийте розчин Люголя. 17. На препарат нанесіть 96% етиловий спирт на 30-60 сек. 18. Промийте препарат водопровідною водою до повного зникнення струмочків барвника. 19. На препарат несіть 1-2 краплі фуксину Прейффера на 1-2 хв. 20.Промийте препаратводою. 21.Висушіть препарат фільтрувальним папером.	Забезпечується стерильність     Культура для виготовлення мазка.     Грампозитивні утворюють міцну сполуку з генціанвіолетом та йодом, яка не вимивається спиртом.
ІІІ. ЗАКІНЧЕННЯ НАВИЧКИ 1. Підготуйте мікроскоп. 2. Проведіть мікроскопію препарату в імерсійній системі. 3. Визначте морфологічні і тинкторіальні властивості мікроорганізмів. 4. Занурте препарат у дезінфікуючий розчин. 5. Проведіть дезінфекцію робочого місця, рук.	Грамнегативні мікроорганізми фарбуються в червоний колір. Грампозитивні – в фіолетовий.   Забезпечується інфекційна безпека.

6. ВИГОТОВЛЕННЯ МАЗКІВ З ПАТОЛОГІЧНОГО МАТЕРІАЛУ
(ГНІЙ, МОКРОТИННЯ)

Мета: Навчити готувати препарати з патологічного матеріалу для мікроскопічного дослідження після забарвлення за способом Ціля-Нільсена – для виявлення мікобактерій туберкульозу, іншими способами – для визначення наявності мікроорганізмів у досліджуваному матеріалі.

ОСНАЩЕННЯ:

- мікроскоп, імерсійна олія;

- предметні скельця;

- спиртівка, сухий спирт, сірники;

- стерильні пастерівські піпетки;

- дезінфікуючий розчин;

- олівець по склу;

- бактеріологічна петля;

- досліджуваний матеріал;

- барвники;

- 96% розчин етилового спирту;

- гумові рукавички, мило, рушник.