Дегидрогеназная активность тканей

Вариант	Окраска ткани	Окраска раствора в пробирке	Активность дегидрогеназ
до опыта	после опыта	до опыта без аммиака	после опыта
без аммиака	после добавления аммиака	без аммиака	после добавления аммиака
Живая ткань
Убитая кипячением ткань

Работа 2. Обнаружение активности пероксидазы и полифенолоксидазы в растительной ткани

Оксидазами называются ферменты, активирующие молекулярный кислород, который соединяется с отщепляемым от субстрата водородом, образуя воду или пероксид водорода по схеме:

2АН2 + О2	оксидаза	2А + 2Н2О
АН2 + О2	оксидаза	А + Н2О2

К этой группе ферментов относится полифенолоксидаза, окисляющая полифенолы кислородом воздуха с образованием соответствующих хинонов:

		+ О2	полифенолоксидаза			+ 2Н2О

Этот фермент представляет собой белок, содержащий медь (0,2-0,3%).

Пероксидаза – фермент, катализирующий окисление полифенолов и ароматических аминов кислородом пероксида водорода или органических перекисей. Пероксидаза образует с Н₂О₂ комплексное соединение, в результате чего пероксид активируется и приобретает способность действовать как акцептор водорода.

		+ Н2О2	пероксидаза		+ 2Н2О

Пероксидаза – двухкомпонентный фермент, простетическая группа его содержит железо, соединенное с остатком четырех пиррольных колец в виде гематина. Поскольку пероксидаза особенно легко окисляет полифенолы, она играет важную роль в дыхании растении.

Обнаружение пероксидазы и полифенолоксидазы основано на изменении окраски при окислении полифенолов в хиноны.

Цель работы: выявить активность полифенолоксидазы и пероксидазы в соке клубня картофеля по изменению окраски окисляемого субстрата на бурую.

Объекты: клубни картофеля.

Реактивы и оборудование: 1%-ный раствор гидрохинона, 3%-ный раствор Н₂О₂; терка, кристаллизатор, скальпель, штатив с пробирками, воронка, градуированная пипетка на 5 мл и на I мл, спиртовка, спички, держалка для пробирок, марля, фильтры бумажные.

Ход работы:

1. Натереть на терке очищенный клубень картофеля.

2.Из мезги отжать через марлю в пробирку сок, который профильтровать через бумажный фильтр в чистую пробирку.

3. В 4 пробирки внести реактивы и картофельный сок согласно схеме опыта:

I. 5 мл раствора гидрохинона + 1 мл Н₂О₂ + 1мл сока;

II. 5 мл раствора гидрохинона + 1 мл Н₂О₂;

III. 5 мл раствора гидрохинона + 1 мл сока;

IV. 5 мл раствора гидрохинона + 1 мл Н₂О₂ + 1мл сока(предварительно прокипяченного на спиртовке).

4. Отметьте окраску содержимого пробирок.

Оформление работы: заполните таблицу, объясните результаты проведенного опыта.

Результаты и обсуждение:

Таблица 1