Постановки реакции Райта

1.Реакцию ставят методом равных «объемов» в тщательно вымытых сухих пробирках в объеме 1мл.

2.Кровь для исследования берут с соблюдением правил асептики из пальца. Исследуемая сыворотка должна быть совершенно прозрачной (без примеси эритроцитов) и применяется не позднее 3-4 дней после взятия крови;

3.Реакцию ставят не менее, чем в 5 разведениях сыворотки (1:50, 1:100, 1:200, 1:400, 1:800), так как она иногда может быть отрицательной в низких и положительной в высоких разведениях – явление, наблюдавшееся иногда в сыворотках с высоким титром, так называемые «проагглютинационные» зоны.

4.Для реакции Райта употребляют исходную взвесь диагностикума, разведенную в 10 раз. Перед употреблением диагностикум тщательно встряхивают.

5.Сыворотки и диагностикум для РА разводят 0,9% раствором хлористого натрия, содержащим 0,5% фенола.

6. В пробирки разливают по 0,5мл сыворотки в разведениях 1:25, 1:50, 1:100, 1:200, 1:400 и 1:25 (для контроля сыворотки).

7.Во все пробирки, кроме последней, добавляют по 0,5мл разведенного в 10 раз диагностикума, в последнюю пробирку такое же количество карболизированного 0,9% раствора хлористого натрия.

8.Таким образом, получают ряд разведений сыворотки 1:50,1:100,1:200,1:400, 1:800 и 1:50.

Пробы агглютинации ставят на 24 часа в термостат при температуре 37⁰С±0,5⁰, после чего производят учет результатов реакции путем сравнения с контролями диагностикума.

9. Контрольные разведения диагностикума готовят следующим образом: в 4 пробирки последовательно наливают 1, 2, 3 и 4 мл разведенного диагностикума, затем в том же порядке добавляют 3мл, 2 мл и 1 мл 0,9% раствора хлористого натрия, содержащего 0,5% фенола; в последнюю пробирку ничего не добавляют. После взбалтывания содержимого переносят в другой ряд пробирок по 0,5мл антигена каждой концентрации и 0,5мл карбо-лизированного 0,9% раствора хлористого натрия. Таким образом получают 4 пробирки (контрольные разведения с различной степенью просветления) 75% - 3+, 50% - 2+, 25% - 1+ и О, которые вместе с опытными пробирками помещают в термостат при температуре 37⁰С ± 0,5⁰ на 18 - 24 часа.

10.Учет РА производят через 24 часа путем сравнения степени просветления в опытных пробирках с соответствующими разведениями контрольного диагностикума.

Учет результатов производят на темном фоне. Титр РА выражают в Международных единицах антител (МЕ).

При диагностической оценке результатов реакции рекомендуется следующая схема: при содержании в испытуемых сыворотках менее 100 МЕ антител (титр 1:50) результат «сомнительный», при содержании 100-200 МЕ антител (титр 1:100-1:200) результат «положительный», при содержании свыше 200МЕ (титр – 1:400 и выше) – результат «резко положительный».

Схема