Алгоритм микробиологического исследования при газовой гангрене

Первый день. Микроскопия исследуемого материала, окраска по Грамму и по Ожешко. Наличие Гр+ спороносных палочек позволяет выдать ориентировочный ответ: клостридии. Исследуемый материал делят на две порции (для биопробы и бакисследований). Часть материала засевают на среду Китта-Тароцци, Вильсона-Блера и агар Цейсслера. Культивируют в анаэробных условиях при 43 градусах Цельсия. При появлении через 6 часов признаков роста (почернение и разрывы высокого столбика Вильсона-Блера, а также наличие зоны гемолиза, колоний на среде Цейсслера). Выделяют чистую культуру на среде Китта-Тароцци.

Проводят идентификацию по морфологии, биохимической активности и подвижности. Для определения видов возбудителей газовой гангрены ставят биопробу.

Для постановки биопробы из другой части материала экстрагируют экзотоксин. С этой целью материал растирают в стерильной ступке с песком, заливают физ.раствором для экстракции токсина на 1 час и фильтруют через бумажный фильтр. Полученный фильтрат токсина разливают в 5 пробирок по 0,9 мл.

В каждую пробирку приливают по 0,6 мл антитоксических сывороток против каждого возбудителя газовой гангрены: перфрингенс, новви, септикум, хистолитикум, сорделли. В 6 пробирку вносят физ.раствор.

Смесь токсина с антитоксическими сыворотками оставляют при комнатной темпетаруре на 40 минут для нейтрализации токсина. В опыт берут шесть пар мышей, которым внутривенно вводят по 0,5 мл из каждой пробирки. Гибель животных наступает в сроки от 5 часов до 3 дней. При положительном результате в живых из 12 мышей остаются контрольные мыши и одна пара из опытных мышей, у которых произошла нейтрализация токсина соответствующей антитоксической сывороткой.

Если остались живы мыши, которым ввели смесь токсина с сывороткой перфрингенс, дают ответ: С.Perfringens. При отрицательном результате биопробы стявят биопробы с чистой культурой.