Алгоритм исследования

День первый:

Ликвор центрифугируют, осадок микроскопируют, окрашивая препарат водным раствором фуксина или метиленовым синим. Обнаружив диплококки бобовидной формы, расположенные внутри- и внелейкоцитарно — выдаем предварительный ответ. Далее, каплю ликвора засеваем на СА штрихами. Оставшийся осадок в центрифужной пробирке заливают полужидким СА. Посевы помещают в термостат при 37 градусах Цельсия.

Слизь и носоглотки, взятая стерильным тампоном с загнутым концом вверх. Извлекая тампон не касаться языка, щек, зубов. Посев сразу на чашки Петри с СА+линкомицин. Данный антибиотик подавляет рост сопутствующих Гр+ кокков в слизи, не действуя на менингококк. Засеянные чашки доставляют в лабораторию, охраняя от охлаждения и высыхания. Термостатирование при 37 градусах Цельсия.

Кровь, 5-10 мл помещают во флакон с сахарным бульоном в соотношении 1:10. Термостатирование при 37 градусах Цельсия.

Второй день:

Изучение культуральных свойств культур, выросших на чашках Петри (ликвор, слизь). При наличии подозрительных колоний их выделяют на чашки Петри с СА для получения чистой культуры. Посев штрихом. Термостатирование при 37 градусах Цельсия.

Изучение роста на сахарном бульоне (посев крови). При наличии его пересев на СА. При отсутствии роста посевы в колбе вновь помещают в термостат, выдерживая их до 10 суток с контрольными высевами на 3, 5 и 7 сутки. Если после 10 суток рост не появился на сахарном бульоне и на СА при контрольных высевах, выдаем отрицательный ответ и исследование прекращаем. Для стимуляции выделения гемокультуры посевы помещают в эксикатор с водой и зажженной свечой, что создает концентрацию углекислого газа в эксикаторе равной 70%.

Третий день:

Изучение роста чистой культуры, проверка ее чистоты — окраска метиленовым синим.

Постановка дифференциальных тестов для отличия от непатогенных Нейссерий (катарального диплококка):

1. Посев на МПА, термостатирование при 37 градусах Цельсия

2. Посев на СА, термостатирование при 37 градусах Цельсия

3. Посев на СА, оставить при 22 градусах Цельсия

4. Посев на ряды Гисса, куда добавить 0,25% сыворотки — термостатирование при 37 градусах Цельсия.

5. Постановка пробы на оксидазу: на колонии чистой культуры наносят каплю диметилпарафенилендиамина. Учет через 1-2 минуты. При наличии фермента оксидазы у культуры колонии окрашиваются в розовый цвет.

6. Определение серогруппы менингококка: на предметное стекло наносят по одной капле неразведенных (концентрированных) антименингококковых сывороток группы А, В, С и др, каплю физ.раствора (контроль). Последовательно в каждую каплю на петле добавляют чистую культуру и эмульгируют. Перед вносом культуры в очередную каплю, бак.петлю прожечь, чтобы антитела одной сыворотки, не попали в каплю другой сыворотки. Учет начинают с контроля — должен быть равномерно мутным. Наличие агглютинатов в одной из рабочих капель определяет группу менингококка.

Четвертый день:

Учет тестов после термостатирования.