Реактивы. 1) Сульфаниловая кислота в HCl (реагент 1), 2) натрий азотисто-кислый NaNO2 (реагент 2), 3) кофеиновый реактив (реагент 3)

1) Сульфаниловая кислота в HCl (реагент 1), 2) натрий азотисто-кислый NaNO₂ (реагент 2), 3) кофеиновый реактив (реагент 3), 4) буферный раствор (реагент 4), 5) 0,9% р-р NaCl, 6) раствор альбумина, 20 г/л.

Стандартный раствор билирубина, 5 мкмоль/л.

Проведение анализа

	Общий билирубин, мл	Прямой билирубин, мл	Стандарт, мл	Контроль, мл
Сульфаниловая кислота (реагент 1)	0,2	0,2	0,2	––
NaNO2 (реагент 2)	1 капля	1 капля	1 капля	––
Кофеиновый реактив (реагент 3)	1,0	––	1,0	1,0
NaCl	––	1,0	––	0,2
Сыворотка крови	0,2	0,2	––	0,2
Стандартный р-р билирубина	––	––	0,2	––
		Перемешивают и оставляют на 10 минут
Буферный раствор (реагент 4)	1,0	1,0	1,0	1,0
		Измеряют оптическую плотность пробы на прямой билирубин против контроля при длине волны 540 нм (зеленый светофильтр). Еще через 10 минут измеряют оптическую плотность пробы на общий билирубин против контроля при длине волны 540 нм (зеленый светофильтр).

Расчет

По формуле рассчитывают концентрацию общего и прямого билирубина, концентрацию непрямого билирубина находят как разность между концентрацией общего и прямого билирубина_.

Концентрация билирубина, мкмоль/л = , где

Е_оп и Е_ст – оптическая плотность опытной и стандартной проб,
С_ст – концентрация стандартного раствора.