Дослід 3. Реакції, що доводять білкову природу інсуліну

а) Реакція Геллера

Принцип методу ґрунтується на осадженні білка концентрованими мінеральними кислотами (окрім фосфатної кислоти), що відбувається в результаті дегідратації білкових молекул та нейтралізації їх зарядів.

Хід роботи. До 5 крапель концентрованої нітратної кислоти обережно по стінці пробірки нашаровують 2 краплі розчину інсуліну. На межі двох рідин виникає білий осад у вигляді невеликого кільця.

б) Біуретова реакція

Принцип методу. В лужному середовищі в присутності солей Купруму розчин білка набуває фіолетового кольору. Біуретова реакція обумовлена наявністю в молекулі білка пептидних зв’язків, які в лужному середовищі утворюють комплексні сполуки Купруму.

Хід роботи. До 3 крапель інсуліну доливають 5 крапель 10% розчину натрій гідроксиду і одну краплю 1% розчину Купрум(ІІ)сульфату. Рідина забарвлюється у фіолетовий колір.

в) Реакція Фоля

Принцип методу. При додаванні до розчину білка 30% розчину натрій гідроксиду, Плюмбум(II)ацетату з наступним кип’ятінням розчин починає темніти. Реакція обумовлена присутністю в молекулі білка сірковмісних амінокислот – цистеїну, цистину, метіоніну. Ці амінокислоти при нагріванні в присутності натрій гідроксиду руйнуються, утворюючи натрій сульфід (Na₂S).

Плюмбум(II) ацетат реагує з натрій гідроксидом з утворенням натрій плюмбіту. Натрій сульфід взаємодіє з натрій плюмбітом, утворюючи чорний осад плюмбум сульфіду (PbS).

Хід роботи. До 3 крапель розчину інсуліну доливають 5 крапель реактиву Фоля та кип’ятять. Випадає чорний осад Плюмбум сульфіду (PbS).

Дослід 4. Якісна реакція на тироксин (відкриття йоду в гідролізаті тиреоїдину)

Принцип. При руйнуванні тироксину утворюється калій йодит, із якого йод легко витісняється калій йодатом. Йод, що виділився, дає синє забарвлення з крохмалем.

1. 5KJ + KJO₃ + 3H₂SO₄ → 3J₂ + 3K₂SO₄ + 3H₂O

2. J₂ + крохмаль → синє забарвлення.

І-етап. Лужний гідроліз тиреоїдину (готується заздалегідь лаборантами).

Хід роботи. В ступці старанно розтирають 5 таблеток тиреоїдину (препарат щитоподібної залози). Розтерту масу пересипають у колбочку, доливають 5 мл 10% розчину натрій гідроксиду і 5 мл дистильованої води. Колбочку поміщають на азбестову сітку та кип’ятять 15 хвилин.

ІІ-етап. Відкриття йоду в отриманому гідролізаті (виконують студенти).

Хід роботи. До 24 крапель охолодженого гідролізату тиреоїдину доливають 10% розчин сульфатної кислоти до появи кислої реакції на лакмусовому папері (1-2 краплі). Після підкислення доливають 3 краплі 2% розчину калій йодату (непотрібно додавати надлишок KJO₃) і одну краплю 1% розчину крохмалю. Йод, що виділяється, дає синє забарвлення з крохмалем.