Биуретовая реакция

Принцип метода. Биуретовая реакция открывает пептидную связь в белке. В щелочной среде раствор белка при взаимодействии с ионами меди приобретает сине–фиолетовый цвет, а продукты неполного гидролиза его — пептоны — розовое окрашивание. Биуретовую реакцию способны давать вещества, которые содержат не менее двух пептидных связей. Биуретовая реакция схематично протекает так:

Енольная форма полипептида, образованная в сильно щелочной среде, дает отрицательный заряд, и кислород, взаимодействуя с медью, образует ковалентную связь, а, взаимодействуя с атомами азота, медь образует координационные связи. Степень окраски биуретового комплекса зависит от концентрации белка и количества медной соли в растворе. Нельзя добавлять избыток сульфата меди, так как синий осадок гидрата окиси меди маскирует характерное фиолетовое окрашивание биуретового комплекса белка.

Отдельные аминокислоты, такие как гистидин, серин, трионин, аспарагин дают положительную биуретовую реакцию при условии больших концентраций их в растворе.

Примечание: биуретовая реакция получила свое название от производного мочевины — биурета. Биурет, имеющий группировку –CO-NH- образуется при нагревании мочевины с отщеплением от неё аммиака и дает то же окрашивание, что и белки.

Строение биуретового комплекса:

Образование биурета:

Как можно видеть из приведенной выше формулы, биурет в щелочной среде претерпевает полную енолизацию по схеме:

Реактивы: раствор яичного белка (1—2 белка куриных яиц отделяют от желтков, взбалтывают с 1 л воды); едкий натр 10% раствор; сернокислая медь 1% раствор.

Ход работы: к 5 каплям раствора белка прибавляют 3 капли 10% раствора едкого натра и 1 каплю сернокислой меди, перемешивают; содержимое пробирки приобретает фиолетовый цвет.