Изучение кариотипов сельскохозяйственных животных

Цель занятия. Ознакомиться с методикой приготовления препаратов хромосом животных. Изучить и зарисовать кариотипы животных.

Приготовление препарата хромосом крупного рогатого скота. Для приготовления препарата хромосом у животных из яремной вены берут 20 мл крови. В пробирку для взятия крови предварительно добавляют 25 мл физиологического раствора, 0,5 мл раствора гепарина и 0,1 мл раствора смеси антибиотиков (пенициллин+стрептомицин). Кровь разливают в центрифужные пробирки и центрифугируют при 800 об/мин в течение 10 минут. Осторожно отсасывают верхний слой плазмы, содержащий лейкоциты, пастеровской пипеткой во флаконы емкостью 250 мл со средой N 199 с добавлением 20-30% сыворотки крови крупного рогатого скота.

Для стимуляции митоза в суспензию клеток вводят фитогемаагглютинин (ФГА) их расчета 0,1 мл на 10 мл среды. Затем флаконы ставят в термостат при температуре 37,5-38 ⁰С на 72 часа. По истечении этого времени к культуре добавляют колхицин из расчета 2-3 г на 1 мл, перемешивают среду и ставят в термостат еще на 2-3 часа. Затем жидкость с клетками лейкоцитов наносят на предметное стекло и помещают на 5 мин в подогретый до 37 5 ⁰С 1% раствор трехзамещенного лимоннокислого натрия. Препараты фиксируют в охлажденной до 4 ⁰С смеси, состоящей из 3 частей метилового спирта и 1 части ледяной уксусной кислоты.

Окрашивают препарат в течение 60 мин 2% раствором ацетоорсеина. На хорошо изготовленных препаратах и при удачном выборе метафазной пластинки подсчет хромосом не вызовет затруднений. В диплоидном наборе соматических клеток крупного рогатого скота содержится 60 хромосом. Из них 58 аутосом и 2 половые хромосомы. Все аутосомы относятся к телоцентрическому типу, а половые хромосомы являются субметацентриками.

Крупная субметацентрическая хромосома обозначается буквой Х, а малая - буквой Y.

Диплоидное число хромосом у домашних свиней равно 38. Хромосомы различаются по размеру и положению центромеры. Среди хромосом свиньи есть мета-, субмета- и акроцентрические хромосомы.

Сведения о хромосомном наборе кур очень противоречивы. Считают, что в кариотипе петухов содержится 78, а кур - 77 хромосом. В хромосомном наборе этого вида можно четко идентифицировать 8-10 пар аутосом, одну пару половых хромосом у петуха и одну половую хромосому у курицы. Остальные хромосомы очень мелкие и подсчитать их довольно сложно.

Кариотипы некоторых видов сельскохозяйственных животных представлены на рис.6

Рис. 6. Кариотипы быка (2n=60) и петуха (2n=78)

Изучение и анализ кариотипов животных используется для:

-выявления числовых и структурных аномалий хромосом,

-изучения эволюции животных,

-раннего определения пола эмбрионов,

-построения карт хромосом и др. целей