Забор и доставка биологического материла в лабораторию для исследования на кишечные гельминтозы и протозоозы

Фекалии. Доставляется на исследование кашицеобразный или оформленный кал в день дефекации (желательно утренний). При «тугом» кале или запорах желательно подготовить пациента и кал собрать для исследования после приема слабительных с учетом противопоказаний. Нельзя применять красящие кал пищевые продукты и лекарственные препараты (свекла, активированный уголь и т.д.)

Утренний кал без примеси мочи собирается в чистую, сухую стеклянную или пластиковую посуду (посуду можно вымыть и ополоснуть горячей водой в домашних условиях), объемом не менее одной чайной ложки. При этом объем должен быть взят из разных частей кала (начальных, средних и последние вышедших из прямой кишки).

Доставляют также в лабораторию подозрительные включения из кала (подвижные и неподвижные). Вечерний кал также можно собрать в чистую, сухую стеклянную или пластиковую посуду, но при условии хранения, до доставки в лабораторию, в холодильнике при температуре + 2⁰ - +4⁰ С не более 6-8 часов. Для исследования на простейшие (лямблии) кал должен быть доставлен утренний и в день дефекации.

Более длительное хранение кала после дефекации – до 2-х суток допускается при условии забора материала в консервант.При диагностике на простейшие лучше поместить кал в консервант Турдыева (1 часть кала размешать в 2-3 частях консерванта); для диагностики только на яйца, личинки гельминтов можно использовать консервант - раствор Барбагалло в тех же соотношениях. Хранить кал в консерванте до доставки в лабораторию необходимо в сухом, тёмном, прохладном месте.

Кал, для диагностики кишечного амебиаза должен быть доставлен в лабораторию на исследование в стерильной посуде не позднее 15-20 минут после дефекации. При невозможности быстрой доставки - свежий кал (сразу после дефекации) должен быть помещен в стерильную посуду, в консервант Турдыева (1 часть кала размешать в 3 частях консерванта) и доставлен в лабораторию.

Перианальный соскоб (отпечаток) – заранее подготовленными глазными палочками с нанесенным липким клеевым слоем у пациента с перианальных складок вокруг ануса делается отпечаток, при этом пациент не должен подмываться вечером и утром перед забором перианального соскоба (отпечатка). Палочки помещают в пронумерованные пробирки или специальные штативы и доставляют в лабораторию на исследование

6) ПРИНЦИПЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ПРОТОЗООЗОВ
Для обнаружения «кровепаразитов» исследуют цельную кровь, взятую из пальца и приготавливая из нее «тонкий мазок» или «толстую каплю». Препараты из крови для микроскопии готовят обычно на предметных стеклах, от их качества и чистоты в огромной степени зависит эффективность обнаружения и идентификации кровепаразитов.

Рис. 1. Малярийные плазмодии в эритроцитах (препарат-мазок крови больного малярией), стрелкой указан кольцевидный трофозоит в эритроците.

Кровь на кровепаразитов (малярийные плазмодии, лейшмании, филярии) – исследуется периферическая кровь, которая отбирается из пальца обычным гематоскопическим методом и из полученной крови на предметных обезжиренных новых и стерильных стеклах готовится микропрепарат «тонкий мазок» и «толстая капля». Высушенные на воздухе микропрепараты доставляются в лабораторию для специальных методов окраски и паразитологического исследования. Либо пациент направляется в лабораторию, где одновременно будет произведен забор крови из пальца, подготовлены микропрепараты и проведено паразитологическое исследование. Забор крови, методы приготовления микропрепаратов и методы исследования проводятся в соответствии с нормативным документом: МУК 3.2. 987 –00 «Паразитологические методы диагностики малярии».

7) При межпальцевой форме микоза стоп для микроскопического исследования используют кожные чешуйки и обрывки мацерированного рогового слоя. Участок ногтя, который необходимо взять для микроскопического исследования, зависит от формы онихомикоза. При поверхностной форме необходимо делать соскоб с поверхности ногтевой пластинки.

При самой частой дистально-латеральной форме используется соскоб с ногтевого ложа, из-под пластинки (подногтевой гиперкератоз) с частью срезанной измененной ногтевой пластинки. При проксимальной подногтевой форме для забора материала используются особые методы (высверливание окон с помощью бормашины, биопсия ногтя).

При сквамозно-гиперкератотической форме микоза стоп чешуйки соскабливают с подошвенной поверхности. При дисгидротической форме микоза стоп для исследования срезают покрышки пузырей.

8) МИКОЗЫ СТОП В первом случае материал смешивают с равным количеством спирта с глицерином. При окраске по Граму дрожжевые клетки и псевдомицелий выглядят темно-фиолетовыми, по Цилю-Нильсену - синими, а по Романовскому-Гимза - розово-фиолетовыми. При этом отличительным признаком дрожжевой клетки является почкование - обнаружение фигуры «песочных часов». Взятие материала со слизистой оболочки полости рта, половых органов, с кожи красной каймы губ, с углов рта, с кожи крупных и мелких складок осуществляется стерильным тампоном. Тампон после взятия материала помещается в другую стерильную пробирку с жидким суслом. Пробирка с тампоном направляется в микробиологическую лабораторию. Выделение чистой культуры дрожжеподобных грибов рода Candida проводится по общепринятой микробиологической методик

9) Лабораторная диагностика чесотки. Первый и последний методы общеприняты в нашей стране. Успех лабораторной диагностики чесотки зависит от умения врача или лаборанта обнаружить чесоточные ходы. В этих случаях рекомендуется применять окраску подозрительного элемента 5% спиртовым раствором йода, анилиновыми красителями, тушью или чернилами. Эти участки более интенсивно впитывают красящее вещество, более контрастно прокрашиваются и хорошо визуализируются.

Результат лабораторной диагностики чесотки считается положительным, если в препарате обнаруживаются самка, самец, личинка, нимфы, яйца, опустевшие яйцевые оболочки.

10) ГОНОРЕЯ венерическое заболевание, вызываемое гонококком. Поражаются преимущественно слизистые оболочки мочеполовых органов. Возможны также поражения конъюнктивы, носоглотки, миндалин, реже - прямой кишки. Встречаются и тяжёлые системные поражения суставов, нервной, сердечно-сосудистой и дыхательной систем, может развиваться гонококковый сепсис. Гонорея относится к самым распространённым бактериальным инфекциям: по данным ВОЗ ежегодно в мире заболевает не менее 150-180 млн. человек. Возбудители гонореи - гонококки. Вне человеческого организма гонококки быстро погибают по мере высыхания, под действием нагревания свыше 56° С, антисептических препаратов, прямых солнечных лучей. Источником заражения является больной гонореей. Взрослые люди заражаются практически всегда половым путём. Дети - исключительно девочки - через инфицированные мочалки, губки, ночные горшки, полотенца, пелёнки. В последние годы среди источников заражения гонореей повысился удельный вес лиц, которые занимаются самолечением. После плохолеченной гонореи возможно появление форм гонококков, устойчивых к пенициллину и другим антибиотикам.

Различают свежую - острую, подострую и торпидную (с давностью до 2 месяцев), хроническую (свыше 2 месяцев и неустановленной давности) и скрытую (латентную) гонорею. При скрытой гонорее имеются осумкованные очаги воспаления со слабопатогенными гонококками, при вскрытии которых гонококки выходят на поверхность слизистых оболочек половых органов и вызывают их воспаление. От момента заражения до появления клинических признаков заболевания проходит от 3 до 4 дней. Иногда инкубационный период удлиняется до 2- 3 недель и более. Удлинению сроков инкубационного периода способствует приём антибиотиков или других сульфаниламидных препаратов по поводу сопутствующих заболеваний или при самолечении.

Бактериологическое исследование
Наиболее распространенным методом лабораторной диагностики гонореи является бактериоскопическое исследование, при котором отделяемое мочеполовых органов наносят тонким слоем на предметное стекло, а затем окрашивают.
Гонококки хорошо прокрашиваются всеми основными анилиновыми красителями. Чаще всего употребляют 1% раствор водного или леффлеровского синего или 1% раствор эозина на 60-70% спирте и 1 % водный раствор метиленового синего. Мазок, высушенный на воздухе и фиксированный, на 15-30 с заливают раствором эозина, смывают водой и на 30 с заливают раствором метиленового синего. Краску смывают водой, препарат высушивают и просматривают под микроскопом с иммерсионной системой. При окраске метиленовым синим на фоне лейкоцитов и эпителиальных клеток, протоплазма которых бледно-голубого цвета, а ядра – синего, выделяются интенсивно прокрашенные гонококки. Эта окраска имеет лишь ориентировочное значение при микроскопической диагностике гонореи, так как все кокки окрашиваются в синий цвет.
В. Н. Беднова с соавторами (1983) вместо метиленового синего рекомендуют окрашивать мазки 0,5 % раствором бриллиантового зеленого в течение 1 мин. При этом гонококки более интенсивно окрашиваются в зеленый цвет, чем лейкоциты и эпителиальные клетки.
При бактериоскопической диагностике гонореи обязательно применяют метод окраски мазков по Граму, основанный на свойстве гонококка обесцвечиваться спиртом. Кокки, не относящиеся к роду нейссерий, остаются окрашенными.
Окраска мазков по Граму. Реактивы и растворы: 1. 1% водный раствор кристаллического фиолетового. (Краску растворяют в горячей дистиллированной воде, раствор охлаждают и фильтруют через двойной бумажный фильтр). 2. Раствор Люголя (1 г кристаллического йода, 2 г калия йодида, 300 мл дистиллированной воды). 3. 96% этиловый спирт. 4.1% водный раствор нейтрального красного.
На высохший и фиксированный на пламени мазок кладут кусочек фильтровальной бумаги по размеру предметного стекла или несколько меньше, наливают раствор кристаллического фиолетового. Через 1-2 мин бумагу с краской снимают, мазок смывают водой и на 0,5-1 мин в зависимости от толщины мазка заливают раствором Люголя. После этого раствор сливают и мазок помещают в ванночку со спиртом для обесцвечивания под визуальным контролем, погружая и вынимая его из спирта до тех пор, пока с него не перестанут стекать струйки краски бледно-серого цвета. Препарат быстро промывают в воде, на 2 мин наливают раствор нейтрального красного, затем опять промывают в воде и высушивают на воздухе. Препарат помещают под микроскоп с иммерсионной системой при плоском зеркале и открытой диафрагме. В мазке, окрашенном по Граму, на розовом фоне протоплазмы лейкоцитов выделяются гонококки ярко-розового цвета. Кроме того, гонококки могут локализоваться в нейтрофильных гранулоцитах. Часто они располагаются на эпителиальных клетках или под ними.

11) ТРИХОМОНИАЗ Трихомониаз (старое название трихомоноз) — самая распространенная инфекция передающаяся половым путем.

Возбудителем трихомониаза является одноклеточный паразит — вагинальная трихомонада (Trichomonas vaginalis).

По данным ВОЗ, вагинальной трихомонадой заражены 170 миллионов человек (реальная количество больных может быть значительно больше). Распространенность трихомониаза среди взрослого населения развивающихся стран достигает 40%, в развитых странах трихомониаз встречается реже (2–10%).

Передача возбудителя происходит при половых контактах. В редких случаях возможна контактная передача, через полотенца, купальники, при грубых нарушениях правил личной гигиены.

Трихомониаз поражает как женщин, так и мужчин. Причем клинические проявления чаще возникают у женщин. У мужчин трихомониаз часто протекает без симптомов (трихомонадоносительство).

Симптомы трихомониаза у женщин — желто-зеленые выделения из влагалища (часто пенистые с неприятным запахом, зуд в области влагалища, неприятные ощущение при половых контактах и при мочеиспускании).

Симптомы трихомониаза у мужчин — чаще всего проявляются симптомами уретрита — жжением при мочеиспускании, во время и после полового акта. Трихомонадная инфекция может приводить к развитию хронического простатита.

Трихомониаз увеличивает риск заражения и передачи ВИЧ-инфекции. У женщин больных трихомониазом выше риск развития рака шейки матки.

Диагностика мочеполового трихомониаза проводится путем микроскопии нативных препаратов, а также мазков, окрашенных метиленовым синим, по Романовскому-Гимзе и по модифицированному способу Грама. Для обнаружения трихомонад в нативных препаратах исследуется эякулят, секрет предстательной железы и осадок мочи у мужчин и смыв из влагалища у женщин.