Реакция бласттрансформации лимфоцитов

Бласттрансформация лимфоцитов - фактически, это размножение делением лимфоцитов в результате контакта с антигеном или аллергеном.

Для постановки реакции бласттрансформации in vitro у больного в асептических условиях берут 5-10 мл крови в пробирку, содержащую 100-200 ЕД гепарина, осторожно перемешивают и помещают на 60 мин в термостат при температуре 37°С для осаждения эритроцитов. После инкубации надосадочный слой плазмы отсасывают в стерильную пробирку. Определяют число лимфоцитов в 1 мкл.

Затем взвесь лимфоцитов разводят питательной средой 199 таким образом, чтобы в 1 мл содержался 1-2 млн лимфоцитов. Приготовленную лимфоцитарную взвесь разливают в стерильные флаконы по 1 мл, добавляют 0,1 мл предварительно оттитрованного аллергена. Флаконы закрывают пробирками и помещают в термостат при температуре 37°С на 72 часа.

Затем готовят мазки, фиксируют и окрашивают по Романовскому. Интенсивность бласттрансформации оценивается путем подсчета бластных клеток на 1000 клеток и определения их процентного содержания.

Реакция оценивается как положительная, если число бластных форм не менее 4% от общего числа культивируемых клеток; максимальное число бластных клеток при действии специфического аллергена может достигать 35%.

Реакция гладкомышечного органа сенсибилизированного животного при контакте с аллергеном (по Шульцу-Дейлу)

Исследование проводят на отрезке изолированной тонкой кишки. Препарат длинной 3-4см готовят из проксимального отдела тощей кишки морской свинки, сенсибилизированной лошадиной сывороткой. С обоих концов на кишку накладывают лигатуру, одну из которых закрепляют на стеклянном крючке, опущенном в сосуд, заполненный раствором Тироде. Другую лигатуру соединяют с миографом для записи сокращений кишки на кимографе. Включают кимограф и в раствор Тироде добавляют сыворотку крови собаки (неспецифический аллерген) и отмечают отсутствие сокращений отрезка кишки. Раствор Тироде заменяют свежим, вводят в него 1-2 мл лошадиной сыворотки (специфический аллерген), отмечают резкое сокращение отрезка кишки.