Определение мочевины в сыворотке крови по цветной реакции с диацетилмонооксимом

Принцип метода. Мочевина образует с диацетилмонооксимом в присутствии тиосемикарбазида и солей железа в кислой среде окрашенные соединения, интенсивность окраски которых пропорциональна содержанию мочевины в сыворотке крови. Методы этой группы основаны на реакции Фирона, протекающей в два этапа. Первый этап заключается в гидролизе диацетилмонооксима с образованием диацетилкетона и гидроксиламина. На втором этапе диацетилкетон взаимодействует с мочевиной с образованием окрашенного диазинового производного. Для окисления гидроксиламина могут применяться: персульфат натрия, мышьяковая кислота, хлорная кислота, феназон, катионы. Для интенсификации окраски и ее стабильности применяются: тиосемикарбазид, фенилантраниловая кислота, глюкуронолактон, катионы, триптофан, нитриты.

Мочевина
Диацетилмонооксим на первой стадии в воде распадается на диацетилкетон и гидроксиламин:

Далее образующийся диацетилкетон конденсируется c мочевиной, образуя окрашенное диазиновое производное. Это соединение (ярко-розового цвета) поглощает свет в видимой области спектра при 500 – 560 нм, молярный коэффициент экстинкции (e) порядка нескольких тысяч, что позволяет определить очень малое содержание мочевины (гораздо более низкое, чем содержание в крови).