Определение реакции оседания эритроцитов (РОЭ)

Цель: Изучение методики определения РОЭ в крови рыб

Материал и оборудование: живая рыба, аппарат Панченкова, фарфоровая чашка или часовое стекло, вата, марля, 5 % раствор лимоннокислого или щавелевого натрия, спирт, эфир.

Задание: I. Отберите кровь из хвостовой вены рыбы.

2. Зарядите аппарат Панченкова и проведите определение РОЭ.

3. Сделайте выводы.

Теоретическое обоснование

Реакция оседания эритроцитов (РОЭ) заключается в склеивании эритроцитов и оседании их на дне сосуда, в котором находится кровь. Эритроциты заряжены отрицательно и, поэтому они, отталкиваясь друг от друга, не склеиваются. Однако, при адсорбции различного рода частиц (например, белка) эритроциты теряют свой заряд, что делает возможным их склеивание с другими эритроцитами. Образовавшиеся комочки эритроцитов начинают оседать на дно сосуда. Оседание эритроцитов происходит потому, что их удельный вес больше, чем удельный вес плазмы. Скорость оседания эритроцитов зависит от белкового состава плазмы, главным образом, от соотношения альбуминов и глобулинов (в норме альбумино-глобулиновый коэффициент А / Г = 1,5 – 2,3). Незначительное изменение этого соотношения вызывает уменьшение или увеличение скорости оседания эритроцитов. Увеличение количества глобулинов ускоряет оседание эритроцитов, что часто бывает при различных патологических процессах и токсикозах. Поэтому РОЭ широко применяется в рыбоводной практике для оценки физиологического качества рыбы и для диагностики различных заболеваний и токсикозов.

Для определена РОЭ пользуются прибором Панченкова, который состоит из нескольких стеклянных, специально проградуированных капилляров, помещенных в штатив. Капилляры закрепляются в строго вертикальном положении между резиновой пробкой и верхней упорной планкой (рис. 14).

Ход работы

Для определения РОЭ необходимо избежать свертывания крови. С этой целью в капилляр до метки Р ртом насосите из колбы противосвертывающее вещество – 5 % раствор лимоннокислого натрия и осторожно в виде капли выдуйте его на дно фарфоровой чашки или в углубление часового стекла. После этого приступайте к взятию крови из хвостовой вены рыбы. Получив крупную, нерастекающуюся каплю крови на отсеченном скальпелем хвостовом отделе рыбы поднесите к ней капилляр, промытый цитратом натрия, первоначально под углом 45°. По мере того как кровь будет подниматься в капилляр, меняйте его положение до горизонтального и несколько ниже. Следите за тем, чтобы в капилляр не попадали пузырьки воздуха. Наберите кровь до метки К и осторожно выдуйте ее в раствор цитрата натрия на дне фарфоровой чашки или в углубление часового стекла. Далее, в фарфоровой чашке тщательно перемешайте кровь с раствором цитрата натрия, набирая ее несколько раз в капилляр и опять выдувая. Затем наберите раствор крови в капилляр до метки К, закройте свободное верхнее отверстие капилляра указательным пальцем, укрепите узкий его конец между прокладкой и верхней перекладиной в строго вертикальном положении. Помните, что верхний конец капилляра можно открыть только тогда, когда его нижний конец придавит резинку. В рабочем журнале отметьте время, когда капилляр был поставлен в гнездо аппарата. Вследствие постепенного оседания эритроцитов верхний слой раствора, находящегося в пипетке, становится светлым. По высоте этого светлого неокрашенного столба плазмы крови через час определите на сколько миллиметров осели эритроциты (мм/ч). На основании полученных результатов сделайте вывод о физиологическом качестве исследуемой рыбы.

Вопросы для контроля

1. Факторы, определяющие скорость оседания эритроцитов.

2. Зависимость РОЭ от различных факторов и физиологического состояния организма.

3. Значение альбуминов и глобулинов для РОЭ.

6. Определение лейкоцитарной формулы.

Цель: Изучить значение определения лейкоцитарной формулы у рыб

Материал и оборудование: окрашенные мазки крови рыб, микроскоп с подвижным станком, осветители СИ – 32 или СИ – 19, счетчик для подсчета лейкоцитов клавишный, вата, марля, иммерсионное масло, стеклянная палочка.

Задание: 1. Определите лейкоцитарную формулу у рыб.

2. Сделайте выводы.