Принципы лабораторной диагностики гриппа

Материал для исследования:

○ отделяемое из респираторного тракта

○ мазки и смывы со слизистой оболочек ВДП

○ промывные воды бронхов

○ мокрота

Цитологическое исследование:

○ окраска по Романовскому-Гимзе

○ признаки ЦПД вирусов

○ окраска смесью основного фуксина и метиленового синего

○ в цитоплазме цилиндрического эпителия, дегенерированных лейкоцитов и макрофагов

есть широко контурируемые включения, окрашенные в красный цвет

○ это есть дифференцировка от аденовирусной инфекции (деструкция клеток, вакуолизация

ядер, образование внутриядерных включений)

Вирусологическое исследование:

○ исследуемый материал помещают в транспортную среду, в которой находятся а/м

препараты ШСД для уничтожения сопутствующей бактериальной флоры

○ центрифугирование материала

○ выделение чистой культуры: заражение культур клеток надосадочной жидкостью

○ типы клеточных культур:

○ клетки человека

○первичные культуры эмбриональных клеток

○диплоидные линии фибробластов

○перевиваемые клеточные линии HeLa, HEp-2

○ клетки животных

○первичные культуры клеток почек обезьян

○линии мышинных фибробластов

○ культивирование длится от 2-3 до 20 суток

○ аденовирусы - 6 суток

○ риновирусы - 4-5 суток

○ вирус гриппа - 3-4 суток

○ реовирусы - 3 недели

○ индикация по ЦПД

○ гемагглютинирующие вирусы (грипп, парагрипп) - реакция гемадсорбции (+

еще до появления ЦПД)

○ респираторные вирусы - ИФ, РТГА, РСК, РН, ИФА (+типирование),

электрофорез, ПЦР, метод нуклеиновых зондов

○ для коронавирусов, РСВ - не применяется (сложно культивировать)

○ иногда: куриные эмбрионы, РГА, +титр вируса

○ вирус гриппа А - агглютинация эритроцитов курицы, морской свинки, человека с

группой крови 1(0)

○ вирус гриппа В - эритроциты курицы

○ серотипирование:

○ грипп А - Н- и N-а/г (гемагглютинин, нейроаминидаза)

○ Н-а/г - РТГА - отсутствие гемагглютинации

○ N-а/г - реакция ингибиции нейроаминидазы и реакция иммунопреципитации в геле

Экспресс-методы:

1. Иммунохимические исследования:

○ ИФ, прямой, непрямой

○ обнаружение светящихся вирусных включений

○ грипп, парагрипп - включения в цитоплазме

○ аденовирус - включения в ядре

○ ИФА, РИА

2. Молекулярно-биологические исследования:

○ обнаружение нуклеиновых кислот вируса методами ПЦР/ДНК-зондов

Серодиагностика:

○ метод парных сывороток

○ кровь берут на 1й и 3й неделе заболевания

○ д.з.: 4 раза

○ РСК, РТГА, РН, НИФ, ИФА

○ а/т к а/г нуклеопротеида вируса парагриппа - РСК

○ а/т к а/г суперкапсида парагриппа - РТГА

○ Грипп:

○ РСК, РТГА со стандартными диагностикумами (наборы эталонных штаммов

различных серотипов вируса гриппа