Методическое указание к лабораторной работе

Работа № 1. Определение содержания глюкозы в сыворотке крови.

Принцип метода: Глюкоза при нагревании с о-толуидином в растворе уксусной кислоты дает зеленое окрашивание, интенсивность которого пропорциональна содержанию глюкозы.

Ход работы:

1. Центрифугирование.

В центрифужную пробирку внести 0,9 мл 3% р.–ра ТХУ и по стенке 0,1 мл крови, смешать и центрифугировать при 5 тыс. об/мин., полученный супернатант слить в чистую пробирку.

2. Проведение цветной реакции.

В три чистые, маркированные пробирки внести реагенты (табл. 5)

Таблица 5. Приготовление реакционных смесей

	Пробирки
Опыт	Контроль	Стандарт
Супернатант	0,1	-	-
Физраствор	-	0,1	-
Р. – р. глюкозы	-	-	0,1
О-толуидин	4,5	4,5	4,5

Пробирки плотно закрыть крышками из фольги и поставить точно на 8 минут в кипящую водяную баню, по истечении этого времени осторожно остудить под струей холодной воды и использовать для колориметрического анализа. Если жидкость после нагревания мутна, ее необходимо вновь центрифугировать.

3. Колориметрирование окрашенных растворов провести при длине волны 600 – 650 нм - красном светофильтре в кюветах с ходом луча 10мм.

4. Расчет по формуле: Соп ммоль/л = Сст х Еоп/Ест,

где Сст = 5,5 ммоль/л

В нормальной капиллярной крови, взятой натощак, концентрация глюкозы находится в пределах: У детей 4,1 – 5,6 ммоль/л. У взрослых до 40 лет 3,3 – 5,5 ммоль/л. В 40 – 59 лет 4,1 – 5,9 ммоль/л. В 60 – 90 лет 4,4 – 6,4 ммоль/л. Концентрация глюкозы в сыворотке крови определяется выше примерно на 0,5 ммоль/л.

Клинико-диагностическое значение.

Концентрация глюкозы крови находится под контролем многих органов и систем и поэтому отражает их функциональное состояние, но в первую очередь функциональное состояние инсулярного аппарата и обмена инсулина, затем функциональное состояние эндокринных систем, вырабатывающих антиинсулярные гормоны и метаболизм этих гормонов. В меньшей степени уровень глюкозы отражает состояние внутренних органов, прежде всего печени и почек, а также глюкозозависимых (головной мозг), интенсивно гликолизирующих тканей (опухолевая, жировая) и др. Вот почему при патологических состояниях указанных органов и систем исследуется концентрация глюкозы крови как диагностического и прогностического биохимического показателя, помогающего уточнить или установить диагноз, проследить динамику течения болезни и эффективность лечения, документировать выписку больного.