Приготовление нервно-мышечного препарата

Цель: ознакомиться с методикой приготовления нервно-мышечного препарата лягушки для проведения физиологических исследований.

Объект исследования: лягушка.

Оборудование и материалы: набор препаровальных инструментов, ножницы большие хирургические, ножницы малые (глазные), пинцеты ма-лые (анатомический и хирургический), препаровальная игла, булавки, проб-ковая пластина, раствор Рингера для холоднокровных животных, лигатура, тарелка, тазик почкообразный, салфетки, вата.

Порядок выполнения. Обездвижить лягушку путем разрушения головного и спинного мозга (центральной нервной системы). Эту процедуру можно выполнить двумя способами (этапы препаровки контролируйте по Рис. 1.1 и 1.2).

1. Декапитация (на рисунке не изображена) и разрушение спинного мозга. Взять лягушку за спинку большим и указательным пальцами. Держать брюшком вниз. Обернуть ее салфеткой так, чтобы передние лапки были прижатыми к туловищу, задние – выпрямлены, а голова осталась открытой. Держать лягушку в левой руке (для праворуких!) теменем кверху, ввести в ротовую полость сбоку тупую браншу больших ножниц, а затем быстро, одним движением отсечь верхнюю челюсть на 0,7–1 см дистальнее глазниц. Препаровальную иглу ввести в спинномозговой канал и двумя – тремя поступательно-вращательными движениями разрушить спинной мозг. Для предупреждения значительной кровопотери на место разреза наложить ватный тампон и слегка прижать его пинцетом.

2. Завернуть лягушку в салфетку, как указано выше, взять ее в левую руку так, чтобы большой палец располагался на спинке, а указательный на голове. Указательным пальцем надавить на голову. Между головой и туловищем образуется угол (Рис. 1.1 а). Препаровальной иглой с небольшим нажимом провести по средней линии головы от глазниц сверху вниз, пока игла не соскользнет в небольшую ямку, соответствующую атланто – окципитальной мембране (Рис. 1.1 б).

а

Рис. 1.1. Обездвиживание лягушки:

а – поиск ямки, соответствующей атланто-окципитальной мембране; б – разрушение головного мозга; в – разрушение спинного мозга

Установить иглу перпендикулярно атланто – окципитальной мембране и в этом месте проколоть иглой кожу. Ввести препаровальную иглу в полость черепа и несколькими движениями влево – вправо разрушить головной мозг. Не извлекая иглы из раны, вернуть её в перпендикулярное положение. Повернув иглу, ввести её в спинномозговой канал (Рис. 1.1 в), возвратно-поступательными движениями препаровальной иглы разрушить спинной моз, о чем будем свидетельствовать исчезновение тонуса мышц задних конечностей.

Обездвиженную лягушку взять за задние лапки так, чтобы брюшко отвисло, и перерезать позвоночник на 1–1,5см проксимальнее копчиковой кости (Рис. 1.2.1). Сделать два разреза мягких тканей вдоль позвоночника справа и слева, подрезая кожу и мышцы до симфиза и удалить отвисающие внутренние органы. На этом этапе препаровки остаются задние конечности с крестцом и фрагментом позвоночника. Фрагмент позвоночника захватить салфеткой или ватным тампоном одной рукой, другой рукой, тоже через салфетку, захватить кожный лоскут на спине и одним быстрым движением снять кожу с конечностей (Рис. 1.2.2). Препарат двух задних лапок лягушки положить на тарелку и обильно смочить раствором Рингера.

Необходимо вымыть руки и большие ножницы. Содержащиеся в слизи вещества оказывают повреждающее действие на нервную ткань!

Препарат двух задних лапок взять в левую руку за оставшийся фрагмент позвоночника дорсальной стороной кверху, тазовые кости при этом должны принять почти вертикальное положение, а копчиковая кость выдаваться вверх. Большими ножницами отсечь копчиковую кость до позвоночника (Рис. 1.2.3). Рассмотреть на вентральной стороне лежащие с двух сторон вдоль тазовых костей нервные стволики и, стараясь не нарушить их целостность, разрезать вдоль фрагмент позвоночника и лонное сочленение (Рис. 1.2.4). Разрез проводить аккуратно, так как при неосторожном разделении можно перерезать один из седалищных нервов.На одном из двух полученных препаратов последовательно отпрепарировать седалищный нерв от позвоночника до коленного сустава. Для этого препарат поместить на пробковую пластину вентральной поверхностью кверху, и, придерживая за фрагмент позвоночника, отделить нерв от окружающих тканей. Для этого сомкнутые бранши пинцета аккуратно ввести между нервом и тазовой костью. Разводя бранши пинцета, отделить нерв от окружающих тканей (от позвоночника до бедра). Большими ножницами рассечь тазовую кость как можно ближе к фрагменту позвоночника.

Рис. 1.2. Приготовление нервно-мышечного препарата:

1 – перерезка позвоночника; 2 – снятие кожи с задних конечностей; 3 – удаление копчиковой кости; 4 – препарат задних лапок лягушки, пунктиром обозначена линия разреза позвоночника и лонного сочленения; 5 – задняя лапка после разреза лонного сочленения; 6 – выделение седалищного нерва; 7 – биологический реоскоп («реоскопическая лапка»); 8, 9 – препаровка икроножной мышцы; 10 – перерезка выше и ниже коленного сустава; 11 – нервно-мышечный препарат лягушки: а – икроножная мышца; б – коленный сустав; в – седалищный нерв; г – фрагмент позвоночника

Повернуть препарат дорсальной поверхностью кверху, булавкой зафиксировать препарат на пробковой пластине в области лонного сочленения. Развести пинцетом мышцы бедра в стороны, обнажить седалищный нерв. Взять пинцетом оставшийся фрагмент позвоночника, приподнять его и маленькими ножницами осторожно отсечь окружающие ткани от нерва (Рис. 1.2.5 и 1.2.6). При этом не следует касаться нерва металлическими инструментами. Особенно это трудно сделать при выделении его в области тазобедренного сустава. Если нерв отпрепарирован со сравнительно большим количеством окружающих тканей, то позже их легко удалить пинцетом.

Не следует натягивать нерв, так как это может нарушить его физиологическую целостность (что внешне не заметно). Фрагмент позвоночника держать так, чтобы нерв немного провисал. Этот приём позволяет сохранить физиологическую целостность нерва. Во время препаровки необходимо периодически смачивать ткани раствором Рингера, чтобы избежать их подсыхания.

Затем, бедренную кость с мышцами отрезать над коленным суставом. Полученный препарат с XVIII в. принято называть биологическим реоскопом или реоскопической лапкой (Рис. 1.2.7). Лабораторные работы данного занятия будут выполняться на таком препарате. Для других работ, выполняемых на последующих занятиях, необходимо научиться изготавливать и классический нервно-мышечный препарат. Для этого сомкнутые бранши пинцета подвести под икроножную мышцу (Рис. 1.2.8,). Разводя бранши пинцета, отделить мышцу. Под ахиллово сухожилие подвести лигатуру и прочно его перевязать. Перерезать ахиллово сухожилие ниже (дистальнее) перевязки. За лигатуру отвести икроножную мышцу в сторону (Рис. 1.2.9). Отсечь берцовую кость и оставшиеся мышцы под коленным суставом (Рис. 1.2.10). Свободные концы лигатуры связать в петлю диаметром 2–3 см (Рис. 1.2.11).

Результаты. Указать анатомические части нервно-мышечного препарата (см. Рис. 1.2.11).

Выводы. Охарактеризовать значение приготовленных препаратов для изучения возбудимых тканей.