Определение протеолитической активности микробов в молоке

Молоко является средой, которая позволяет одновременно выявлять и сахаролитические, и протеолитические свойства некоторых микроорганизмов. Сахаролитические свойства обнаруживаются при ферментации лактозы, в результате чего в среде накапливается молочная кислота. Молочная кислота, изменяя рН среды, способствует свертыванию казеина и образованию сгустков. При выделении в среду протеолитических ферментов наблюдается пептонизация казеина, в результате которой сгустки расплавляются, и среда просветляется.

Некоторые виды микроорганизмов осуществляют глубокое протеодитическое расщепление белков и пептонов с образованием индола, сероводорода и аммиака.

Образование аммиака свойственно микроорганизмам, дезаминирующим аминокислоты. Эту способность микроорганизмов обнаруживают при их росте в мясо-пептонном бульоне (рец. 19) или бульоне Хотгингера (рец. 20). Для этого пробирки со стерильным бульоном засевают исследуемой культурой микроорганизма. После посева над средой помещают полоску стерильной, красной лакмусовой бумажки, зажимая ее между горлышком пробирки и пробкой (рис. 38).

Образование аммиака обнаруживают по изменению окраски полоски лакмусовой бумажки, которая синеет.

Для выявления индолообразования и образования сероводорода микроорганизмы засевают на бульон Хотгингера, содержащий большое количество свободного триптофана. Сразу после посева между ватной пробкой и пробиркой закрепляют полоску индикаторной бумаги по Морелю, пропитанной раствором щавелевой кислоты (рец. 21), а напротив одновременно также закрепляют индикаторную бумажку, пропитанную уксуснокислым свинцом (рец. 22).

После 24-48 часового инкубирования выделение индола обнаруживается по розовому окрашиванию нижнего конца индикаторной бумажки с щавелевой кислотой, а выделение сероводорода - по черно-бурому окрашиванию индикаторной бумажки с уксуснокислым свинцом.

Рис. 38. Определение наличия аммиака, сероводорода или индола в исследуемой бактериальной культуре: 1 - ватная пробка; 2 - индикаторная бумажка; 3 - питательная среда. А - отсутствие изменения окраски индикаторной бумажки; Б - наличие изменения окраски индикаторной бумажки.