Определение сахаролитических ферментов бактерий в лабораторных условиях с целью их идентификации или диагностики

Сахаролитические свойства фитопатогенных бактерий можно выявить при изучении способности у них разлагать крахмал. Крахмал – полисахарид, находящийся в растительных клетках, разлагается сравнительно небольшим количеством бактерий. Такие бактерии обладают обычно мощным комплексом ферментов, под действием которых происходит гидролиз крахмала на декстрин и мальтозу, а затем – глюкозу. Эти свойства наблюдаются и у некоторых фитопатогенных бактерий. Для выявления способности у бактерий гидролизировать крахмал их высевают штрихами на твердую питательную среду, содержащую растворимый крахмал и выдерживают в термостате семь дней. В результате гидролиза крахмала вокруг таких штрихов образуется светлая зона (ореол), хорошо заметная, если чашки залить раствором йода или Люголя, окрашивающим среду в синий цвет. Если гидролиз крахмала дошел до стадии образования декстринов, то ореолы окрашиваются в красновато-бурый цвет, если же крахмал перешел в сахар, то они остаются бесцветными.
Рецепт применяемой среды: к 1 л расплавленного горячего мясопептонного агара прибавляют 0,5 г растворимого крахмала, предварительно размешанного в небольшом количестве воды, и хорошо перемешивают. После этого агар разливают в пробирки или сотки и стерилизуют в течение 30 мин под давлением 1 атм.
О сахаролитических свойствах бактерий можно судить также и по их поведению на молоке. Под влиянием фитопатогенных бактерий в молоке могут происходить следующие изменения – свертывание, пептонизация, свертывание + пептонизация, либо молоко может оставаться без изменения. Кроме того, на молоке может наблюдаться образование пигмента. Для обнаружения у бактерий способности свертывать молоко его необходимо слегка подогреть на пламени горелки. Изменения, происходящие в молоке под влиянием фитопатогенных бактерий, следует регистрировать периодически. Первый раз записывают изменения на 1–2-й день, затем на 4, 10 и 21-й день. Свертывание молока может быть вызвано действием фермента бактерий, сбраживающего лактозу (молочный сахар), с образованием молочной кислоты, под влиянием которой белок молока (казеин) свертывается, образуя творожистую массу. Сгусток в дальнейшем не изменяется. Свертывание молока под влиянием протеолитического фермента может происходить с дальнейшей его пептонизацией. Отмечают начало и конец этого процесса. Пептонизация может происходить и без предварительного свертывания. При исследовании изменений молока отмечают его консистенцию – вязкую, тягучую, без изменений и цвет – бурый, синий, зеленый и др.