БИЛЕТ № 40

1. Методы выделения чистых культур аэробов и анаэробов.

Аэробны: д ля культивирования микроорганизмов необходимы определенные условия: температура, аэробные или анаэробные условия.

Температура должна быть оптимальной для данного вида. Боль­шинство патогенных бактерий размножаются при 37°С. Однако для некоторых видов оптимальной является более низкая температура, что связано с особенностями их экологии. Так, для палочки чумы, ес­тественным местом обитания которой являются грызуны в период зимней спячки, оптимум температуры составляет 28°С, как и для лептоспир, для палочки ботулизма - 28°С-35°С.

Кроме оптимальной температуры, для культивирования микроор­ганизмов, в зависимости от вида, необходима аэробность или анаэ-робность среды.

Выделение чистых культур аэробов занимает, как правило, три дня и производится по следующей схеме:

1-й день - микроскопия мазка из исследуемого материала, ок­рашенного (обычно по Граму) - для предварительного ознакомления с микрофлорой, что может быть полезным в выборе питательной среды для посева. Затем посев материала на поверхность застывшего пита­тельного агара для получения изолированных колоний. Рассев можно произвести по методу Дригальского на три чашки Петри с питательной средой. Каплю материала наносят на первую чашку и распределяют шпателем по всей чашке. Затем этим же шпателем распределяют остав­шуюся на нем культуру на второй чашке и таким же образом - на тре­тьей. Наибольшее количество колоний вырастет на первой чашке, наи­меньшее - на третьей. В зависимости от того, сколько было микробных клеток в исследуемом материале, на одной из чашек вырастут изоли­рованные колонии.

Такого же результата можно достигнуть, произведя рассев на од­ной чашке. Для этого делят чашку на четыре сектора. Исследуемый материал засевают бактериологической петлей штрихами на первом секторе, затем, прокалив и остудив петлю, распределяют посев из пер­вого сектора во второй и таким же образом последовательно в тре­тий и четвертый сектор. Из отдельных микробных клеток после су­точного инкубирования в термостате образуются изолированные колонии.

2-й день - изучение колоний, выросших на чашках, описание их. Колонии могут быть прозрачными, полупрозрачными или непроз­рачными, они имеют различные размеры, округлые правильные или неправильные очертания, выпуклую или плоскую форму, гладкую или шероховатую поверхность, ровные или волнистые, изрезанные края. Они могут быть бесцветными или иметь белый, золотистый, красный, желтый цвет. На основании изучения этих характеристик выросшие колонии разделяются на группы. Затем из исследуемой группы отби­рают изолированную колонию, готовят мазок для микроскопического исследования с целью проверки однородности микробов в колонии. Из этой же колонии производят посев в пробирку со скошенным пита­тельным агаром.

3-й день - проверка чистоты культуры, выросшей на скошенном агаре путем микроскопии мазка. При однородности исследуемых бак­терий выделение чистой культуры можно считать законченным.

Анаэробны: д ля культивирования анаэробов необходимо понизить окисли­тельно-восстановительный потенциал среды, создать анаэробиоз пу­тем удаления кислорода физическими, химическими или биологичес­кими методами.

К физическим методам можно отнести:

1) механическое удаление воздуха с помощью насоса из анаэростата, в котором помещают чашки с посевами. Одновременно мож­но заменить воздух индифферентным газом: азотом, водородом, угле­кислым газом.

2) выращивание в среде, содержащей редуцирующие вещества. Сре­да Китта-Тароцци - это сахарный бульон с кусочками печени или мяса. Глюкоза и кусочки органов обладают редуцирующей способностью. Среду заливают сверху слоем вазелинового масла, чтобы преградить доступ кислорода воздуха;среды Вильсона — Блера базой является агар-агар с добавлением глюкозы, сульфита натрия и двуххлористого железа. Клостридии образуют на этой среде колонии чёрного цвета за счет восстановления сульфита до сульфид — аниона, который соединяясь с катионами железа (II) дает соль чёрного цвета. Как правило, черные на этой среде образования колонии, появляются в глубине агарового столбика

2. Общая характеристика Т- и В- лимфоцитов. CD номенклатура.

Лимфациты-подвижные мононуклаерные клетки. В зависимости от места созревания в организме они подразделяются на две гетерогенные популяции:Т-(тимус) и В-(бурса Фабрициуса, костный мозг) лимфациты. Играют ключевую роль в обеспечении приобретенного иммунитета, осуществляя специфическое распознавание АГ,индукцию клеточного и гуморального иммунного ответов,различные формы иммунного реагирования. Обладают амебоидным движением, что обеспечивает их подвижность, имеют направленный характер и строго регулируются рядом факторов, заселяют только свои области. Численность лимфоидных популяций находится под жестким контролем. Для выполнения специфической функции лимфоциты несут на своей поверхности прямые АГ рецепторы-иммунокомпетентные клетки. АГспецифические рецепторы лимфоцитов имеют сложное молекулярное строение, уникальное для каждой клетки.

СД-Аг это маркерные малекулы,получившие название АГ кластеров дифференцировки клеток. Широкое распространение получили маркеры иммунокомпетентных клеток. Например, СД3 экспрессируется на популяции Т-лимф, СД4-для субпопуляции Т-хелперов, СД8-цитотоксических Т-лимф Т-киллеров, СД11а обнаруживается на цитоплазматической мембране моно- и гранулоцитов, СД11в-на естественных киллерах, СД19-22-маркеры В-лимф

3. Получение и титрование диагностических сывороток.

Диагностические сыв-это иммунные сыв, которые применяются в различных серологических реакциях для идентификации инфекционных и не инфекционных АГ. Применяют их для диагностики. Приготовление данной сыв:путем гипериммунизации, но только животных. Титром диагностических сыв считается наибольшее ее разведение, способное вызвать видимое изменение реакции.

4. Лабораторная диагностика гонореи.

Материалом для исследования служит гнойное отделимое из уретры, влагалища и шейки матки, из прямой кишки, конъюнктивы глаз, сыв крови. За 2-3 суток перед забором материала необходимо прекратить применение дезинфицирующих и антибактериальных препаратов, воздержаться от мочеиспускания в течение 4-6ч и провести туалет окружающих кожных покровов.

Применяют бактериоскопический, бактериологический и серологический методы.

Бактериоскоп: готовят 2мазка, один окрашивают по Граму(гр- диплококки), а второй-метиленовым синим(незавершенный фагоцитоз), микроскопируют.

Применяют прямой и непрямой варианты РИФ, при прямом мазки обрабатывают флюоресцирующими АТ против гонококков, при непрямом-используют гонококки, сыв больного и антиглобулиновую сыв.

Бактериолог: посев производят непосредственно после забора материала(низкая устойчивость в окр среде) на чашки с сывороточным или асцитическим агаром, добавляют к среде ристомицин и полимиксин(повышают высеваемость). Перед посевом питат среду нагревают в термостате, чашки с посевом инкубируют в эксикаторе в атмосфере, обогащенной 10% СО_2. Оценить характер колоний, мазок окрасить по Граму; выделение чистой культуры(пересев на сывороточный МПА), посев на «пестрый ряд»; определение чувствительности к антибиотикам.

Серологич: при хронической гонорее, при отсутствии выделений; проводят РСК по Борде-Жангу, в качестве АГ применяют гоновакцину или АГ из убитых гонококков. Реакция положительная с 3-4й недели юолезни.

5. Таксономическое положение и характеристика вирусов, передаваемых с донорской кровью.

Гепатит В:

Царство Vira

Семейство Hepadnaviridae

Род Orthohepadnavirus

Гепатит С:

Семейство Flaviviridae

Род Hepacivirus

БИЛЕТ № 45

1. Контроль за санитарным режимом в лечебных и детских учреждениях.

Особое внимание при проведении проверок уделяется санитарно-гигиеническому содержанию всех помещений ЛПУ и соблюдению санитарно-противоэпидемического режима в лечебном учреждении. Ответственность за проведение противоэпидемических мероприятий и соблюдение санитарно-противоэпидемического режима во всех лечебных учреждениях согласно должностным инструкциям, утвержденным главными врачами, возложена на главных медицинских сестер. Главные медицинские сестры обеспечивают соблюдение действующих санитарно-гигиенических нормативов в работе персонала проце­дурных кабинетов, стерилизационных (автоклавных), перевязочных, манипуляционных, прививочных кабинетов.

Составляют график проведения текущих и генеральных уборок в кабинетах, выбор соответствующего дезинфицирующего средства и его концентрации, маркировку уборочного инвентаря, его достаточность и хранение, ведение журналов учета работы бактерицидных облучателей, постановку азопирамовых и фенолфта­леиновых проб с целью контроля качества предстерилизационной очистки изделий медицинского назначения и содержания остатков моющих и дезинфицирующих средств.

Для детских урреждений: все помещения 2 раза в день убирают влажным способом с применением моющих средств. Уборку помещений проводят при открытых фрамугах или окнах. Особо тщательно моют часто загрязняющиеся поверхности (ручки дверей, шкафов, подоконники, выключатели, жесткую мебель и др.) и места скопления пыли (полы у плинтусов и под мебелью, радиаторы, арматуру осветительных приборов, вентиляционные решетки и др.).

Влажную уборку в спальнях проводят после ночного и дневного сна, в групповых — после каждого приема пищи.

Столы в групповых помещениях промывают горячей водой с мылом до и после каждого приема пищи специальной ветошью, которую простирывают, просушивают и хранят в сухом виде в специальной промаркированной посуде с крышкой. Стулья, пеленальные столы, манежы и другое оборудование, а также подкладочные клеенки, клеенчатые нагрудники ежедневно протирают горячей водой с мылом.

Воду для технических целей (уборка помещений групповой, туалета и т.д.) следует брать только из специального крана. Отработанная вода сливается в унитаз с последующей его дезинфекцией одним из разрешенных препаратов.

Ковры ежедневно пылесосят и чистят влажной щеткой или выколачивают на специально отведенных для этого площадках, затем чистят влажной щеткой. Один раз в год их подвергают сухой химической чистке.

Санитарно-техническое оборудование подлежит обеззараживанию независимо от эпидемиологической ситуации. Сидения на унитазах, ручки сливных бачков и ручки дверей моют теплой водой с мылом ежедневно. Горшки моют после каждого пользования при помощи квачей и моющих средств. Ванны, раковины, унитазы чистят дважды в день квачами или щетками с использованием моющих и дезинфицирующих средств (приложение 3).

Уборочный инвентарь для туалета (тряпки, ведра, щетки) маркируют ярким цветом и хранят в туалетной комнате в специальном шкафу. Весь уборочный инвентарь после использования промывают горячей водой с моющими средствами и просушивают.

Дезинфицирующие растворы (в темной посуде) и моющие средства хранят в местах, недоступных детям.

Генеральную уборку всех помещений и оборудования проводят один раз в месяц с применением моющих и дезинфицирующих средств. Окна снаружи и изнутри моют по мере загрязнения, но не реже 2 раз в год (весной и осенью).

Для борьбы с мухами внутри помещений можно использовать механические методы (липкие ленты, мухоловки). Разрешенные химические средства по борьбе с мухами используют в установленном порядке.

Жалюзийные решетки вытяжных вентиляционных систем должны быть открыты; прикрывать их следует только при резком перепаде температур воздуха помещений и наружного воздуха. По мере загрязнения их очищают от пыли.

Очистка шахт вытяжной вентиляции проводится не реже 2 раз в год.

Смену постельного белья, полотенец проводят по мере загрязнения, но не реже одного раза в неделю. Все белье маркируют. Постельное белье, кроме наволочек, маркируют у ножного края. На каждого ребенка необходимо иметь три комплекта белья, включая полотенца для лица и ног, и две смены наматрасников. Чистое белье доставляют в мешках и хранят в шкафах.

По мере необходимости в ДОУ следует проводить дезинсекцию и дератизацию.

2. Иммунодефицитные состояния, причины и следствия.

ИД-это нарушение нормального иммунного статуса, обусловленныые дефектом одного или нескольких механизмов иммунного ответа. Различают первичный(врожденный) и вторичный(приобретенный) ИД. Клиническая картина различных ИД сходна. Симптомы: инфекционные осложнения, гематологические нарушения, расстройства ЖКТ, аутоиммунные процессы, опухоли, аллергические раекции, пороки развития.

Первичные ИД: выделяют такие состояния, при которых нарушение гуморальных и клеточных механизмов связано с генетическим блоком(неспособность организма реализовать то или иное звено иммунологической реактивности). Причины-удвоение хромосом, точечные мутации, дефект ферментов обмена нукл кислот. Проявляются в виде недостаточности фагоцигоза, системы комплемента, гуморального иммунитета(В-системы), клеточного иммунитета(Т-системы).

Вторичные ИД: они формируются под воздействием окружающей среды на уровне фенотипа и обусловлены нарушение функции иммунной системы в результате различных заболеваний или неблагоприятных воздействий на организм. Могут поражаться Т- и В-системы иммунитета, факторы неспецифической резистентности. Встречаются чаще первичных и поддаются иммунокоррекции. Могут быть после перенесенных инфекций и инвазий, при ожогах, при уремии, при нарушении обмена веществ и истощении, при дисбиозах и т.д. по времени возникновения: антенатальные, перинатальные, постнатальные; по клиническому течению: компенсированную, субкомпенсированную, декомпенсированную.

3. Антигенные препараты для диагностики инфекционных заболеваний.

Препараты на основе взвеси убитых микробов, которые применяются для диагностики видов или типов микроорганизмов в определенной реакции(агглютинации, РСК,РПГА..)

Например: брюшнотифозный О- или Н-диагностикум, дизентирийные диагностикумы, туляремийный диагностикум, гонококковый АГ и т.д.

4. Таксономическое положение и характеристика возбудителей госпитальных уроинфекций.

Стафилококк:

Домен: Bacteria

Тип: Firmicutes

Класс: Bacilli

Порядок: Bacillales

Семейство: Staphylococcaceae

Род: Staphylococcus

Вид: Staphylococcus aureus

Стрептококк:

Домен: Bacteria
Тип: Firmicutes

Класс: Bacilli
Порядок: Lactobacillales

Семейство: Streptococcaceae

Род: Streptococcus Вид:Streptococcus pneumoniae Streptococcus pyogenes Синегнойная палочка: Царство: Бактерии Тип: Протеобактерии Класс: Gamma Proteobacteria Порядок: Pseudomonadales Семейство: Pseudomonadaceae Род: Pseudomonas Вид: Pseudomonas aeruginosa Эторобактерии,вирус кори, эшерихии, вирус краснухи, сальмонеллы, шигеллы, иерсинии, энтеробактерии, легионеллы, клостридии, цитомегаловирус, микоплазмы, хломидии, микобактерии, бордетеллы

5. Лабораторная диагностика герпетической инфекции.

Исследуют кровь, грудное молоко, мочу, слюну, отделяемое цервикального канала и спинномозговую жидкость: 1- инфицированные клетки в организме человека характеризуются увеличенными размерами и внутриядерными включениями в виде «глаза совы» (окраска гематоксилин-эозин); 2- вирус выделяют в культуре клеток. Идентификацию проводят с помощью ПЦР, в РИФ и ИФА с использованием моноклональных антител. Антитела в сыворотке крови больных определяют в ИФА, РСК, реакции нейтрализации и др.

Вирусологическая диагностика основана на выделении вируса путем введения исследуемого материала (содержимое везикул, слюна, смывы из глотки) в мозг белым мышам, на роговицу кролика и на хорион-аллантоисную оболочку куриных эмбрионов. О наличии вируса судят по внутриядерным включениям в пораженных клетках, специфичность определяют в реакции нейтрализации. При исследовании парных сывороток больного определяют нарастание титра антител.

П БИЛЕТ № 25

1. Генетика вирусов.

Наследственная информ может быть записана как на ДНК,так и на РНК,в зависимости от типа вируса. Мутации могут возникать спонтанно,в процессе репликации НК вируса, а так же под влиянием внешних факторов и мутагенов. Фенотипически мутации проявляются изменением в АГ структуре, неспособностью вызывать продуктивную инфекцию в чувтсвительных клетках, чувствительностью продуктивного цикла к температуре..Свойстква вирусов могут изменяться при одновременном заражении несколькими вирусами чувствительной клетки. Генетическая рекомбинация встречается чаще у ДНК-содержащих вирусов, среди РНК-содержащих только у тех,которые обладают фрагментированным геномом(н-р вирус гриппа), при рекомбинации происходит обмен гомологичными участками генома. Генетическая реактивация наблюдается м/ду геномами родсвенных вирусов,имеющих мутации в разных генах. В результате перераспределения генетического материала формируется полноценный дочерний геном. Комплементация –когда один из двух вирусов, инфицирующих клетку, в результате мутации синтезирует нефункциональный белок. Немутантный вирус, синтезируя полноценный белок, восполняет его отсутствие у мутантного вируса. Фенотипическое смешивание- если про смешанном заражении чувствительной клетки двумя вирусами часть потомства приобретает фенотипические признаки,присущие двум вирусам, при сохранении неизмененного генотипа.

2. Возрастные особенности противовирусного иммунитета. Значение плацентарного иммунитета в защите новорожденного от некоторых вирусных инфекций (корь и др.).

Во время беременности иммунная система матери проявляет толерантность к антигенным структурам плода, благодаря чему не происходит его отторжения. Это связано с наличием плацентарного барьера, с низкой плотностью антигенов гистосовместимости на клетках трофобласта, а также с супрессорной направленностью иммунных реакций в системе мать — плод. Женский организм, плацента и плод синтезируют ряд белковых факторов (альфа-фетопротеин, уромодулин, белки трофобласта) и небелковых соединений (эстрогены, прогестерон, простагландины Е1 и Е2), подавляющих реакции отторжения.

На 8-й неделе внутриутробного периода в организме плода начинается синтез комплемента, а между 8-й и 10-й неделями появляются В-лимфоциты. Вначале это незрелые клетки, содержащие в цитоплазме тяжелые цепи lgM, а позднее — В-лимфоциты, несущие lgM и lgD на мембранах. Плод синтезирует ограниченные количества lgG. Его содержание в крови до 17 нед. беременности составляет в среднем 0,1 г/л, к 32 нед. повышается до 0,4 г/л, а у новорожденных составляет около 11,0 г/л. Однако у доношенных этот уровень достигается не за счет синтеза, а в результате активного транспорта lgG через плаценту в самые последние недели беременности. Иммуноглобулины других классов через плаценту не передаются. В случае контакта с антигенами иммунная система плода отвечает увеличением синтеза lgM. Повышение концентрации lgM в пуповинной крови более 0,3 г/л свидетельствует об антигенной стимуляции плода или о внутриутробном инфицировании. Синтез lgE может возрасти во внутриутробном периоде у детей из семей с повышенным риском развития атонических заболеваний. В этих случаях повышенная концентрация lgE определяется уже в пуповинной крови. Синтез lgA и особенно его секреторной формы у плода крайне ограничен, и лишь к 3—4 месяцам жизни секреторные lgA регистрируются в слюне, носовой слизи и слезной жидкости ребенка.

Т-лимфоциты появляются у плода на 12-й неделе внутриутробного периода, после этого срока плод способен проявлять слабые реакции гиперчувствительности замедленного типа и отторжения трансплантата. Абсолютное число лимфоцитов в крови резко повышается на первой неделе жизни (физиологический лимфоцитоз, сохраняющийся на протяжении 5—6 лет).

Материнские антитела класса lgG защищают новорожденного от дифтерийного токсина, вирусов полиомиелита, кори, краснухи, от микробных инфекций, вызываемых менингококками и стрептококками, отчасти от столбняка. Клеточно-опосредованная защита от некоторых вирусов и грибков обеспечивается трансплацентарной передачей трансфер-фактора и отдельных интерлейкинов. Однако новорожденные и дети первых месяцев жизни проявляют повышенную чувствительность к респираторному синцитиальному вирусу, а также к вирусу энцефаломиокардита. Полупериод элиминации (или катаболизма) материнских антител класса lgG — 21—23 сут. При крайне ограниченном собственном синтезе lgG у ребенка это ведет к существенному снижению концентрации lgG между 2-м и 6-м месяцами жизни.

Воздействие различных антигенов на первом году жизни вызывает первичный иммунный ответ, проявляющийся повышением синтеза антител класса lgM. Постепенно происходит переключение гуморальных реакций иммунного ответа на синтез антител класса lgG. К концу первого года жизни в крови имеется примерно 50—60% количества lgG и только около 30% lgA от средних значений у взрослых. К концу второго года жизни содержание lgM и lgG составляет уже около 80% значений взрослых, а lgA — около 40%. Содержание lgM достигает уровня такового у взрослых к 3—5 годам., Секреторные иммуноглобулины класса А. и секреторный фрагмент Sc полностью отсутствуют у новорожденных и появляются в секретах после 3-го месяца жизни. Но на протяжении первых четырех лет жизни их концентрация в слюне, назальных секретах в 4—5 раз ниже, чем у взрослых. Это дает основание говорить о недостаточности в первые годы жизни системы местного И.). На 5—7-е сутки происходит первый перекрест в лейкоцитарной формуле крови, нейтрофилез сменяется относительным и абсолютным лимфоцитозом.

Второй критический период (3—6 мес.), характеризуется ослаблением пассивного гуморального И. в связи с элиминацией материнских антител. Сохраняется супрессорная направленность иммунных реакций при выраженном лимфоцитоза в крови. На большинство антигенов развивается первичный иммунный ответ с преимущественным синтезом антител класса lgM, не оставляющим иммунологической памяти. Такой тип иммунного ответа наблюдается при вакцинации против столбняка, дифтерии, коклюша, полиомиелита, кори, и только после 2—3 ревакцинаций формируется вторичный иммунный ответ с образованием антител класса lgG и стойкой иммунологической памяти. Вакцинация может не повлечь иммунного ответа, если в крови детей еще циркулируют материнские антитела или дети по показаниям получали препараты крови, гамма-глобулин, плазму. Дети сохраняют очень высокую чувствительность к респираторному синцитиальному вирусу, вирусам парагриппа, аденовирусам. Вирус гепатита В редко вызывает желтушные формы болезни, чаще акродерматит (синдром Джанотти). Атипично протекают коклюш, корь, которые не сопровождаются развитием И. Проявляется недостаточность системы местного И. (повторные острые респираторные вирусные инфекции); выявляются многие наследственные иммунодефициты; нарастает частота пищевой аллергии.

Третий критический период приходится на второй год жизни, когда значительно расширяются контакты ребенка с внешним миром. Сохраняется первичный характер иммунного ответа на многие антигены, однако синтез антител класса lgM уже переключается на образование антител класса lgG. В этот период дифференцируются клоны В-лимфоцитов, синтезирующие субклассы lgGI и lgG3. Однако синтез субклассов lgG2 и lgG4 запаздывает. Процесс переключения синтеза антител от lgM на lgG находится под контролем особых генов. Супрессорная направленность иммунной системы сменяется преобладанием хелперной функции по отношению к клонам В-лимфоцитов, синтезирующим lgM. Система местного И. остается неразвитой, дети по-прежнему чувствительны к вирусным инфекциям. Дети особенно склонны к повторным вирусным и микробно-воспалительным заболеваниям органов дыхания, ЛОР-органов. Проявления иммунопатологического диатеза (атопические реакции, аутоиммунный диатез) четко не дифференцируются.

Четвертый критический период — 4—6-й годы жизни. В этом возрасте наблюдается второй перекрест в содержании форменных элементов крови. Средняя концентрация lgG и lgM в крови соответствует аналогичным показателям у взрослых, уровень lgA в плазме еще не достигает окончательных значений, но значительно повышается содержание lgE.

Пятый критический период — подростковый возраст (у девочек с 12—13 лет, у мальчиков с 14—15 лет). Пубертатный скачок роста сочетается с уменьшением массы лимфоидных органов. Стимуляция секреции половых гормонов (андрогенов) ведет к подавлению клеточного звена И. и стимуляции его гуморального звена. Содержание lgE в крови снижается. Окончательно формируются типы иммунного ответа (сильный и слабый).

Отклонения в развитии иммунной системы чаще всего проявляются как поздний иммунологический старт. Его причинами служат следующие факторы: низкая масса тела при рождении; внутриутробное инфицирование лимфотропными ДНК-вирусами (цитомегалии, Эпстайна — Барр, герпеса); гипербилирубинемия..(См. календарь прививок)

3. Серологические реакции, применяющиеся в вирусологии.

РТГА-основана на блокаде, подавлении АГ вирусов АТми иммунной сыворотки, в результате чего вирусы теряют свойства агглютинировать эритроциты.

РСК-при соответствии АГ и АТ образуется иммунный комплекс, к которому через Fc-фрагмент АТ присоединяется комплемент, т.е.происходит связывание комплемента комлексом АГ-АТ, если же комплекс АГ-АТ не образуется, то комплемент остается свободным. Проводится в две фазы, в 1й фазе реакции при образовании комплекса АГ-АТ происходит связывание им комплемента, и тогда во 2й фазе гемолиз сенсибилизированных АТми эритроцитов не произойдет(реакция положительная). Если АГ и АТ не соответствуют друг другу, комплемент остается свободным и во 2й фазе присоединится к комплексу эритроцит-антиэритроцитарное АТ, вызывая гемолиз(р-я отриц)

РИФ-прямой:АГ ткани, обработанные иммунными сыв с АТ,меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах люминесценоного микроскопа.Непрямой:используют антиглобулиновую сыв.

ИФА-выявление АГ с помощью соответствующих им АТ, конъюгированных с ферментом-меткой(щелочноя фосфотаза,пероксидаза хрена). После присоединения АГ с меченной ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат/хромоген. Субстрат расщепяется ферментом, и изменяется цвет продукта реакции-интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул АГ и АТ.

РН-АТ иммунной сыв способны нейтрализовать повреждающее действие вирусов на чувствительные клетки и ткани, что связано с блокадой АГенов АТелами. Проводят путем введения смеми АГ-АТ животным или в чувствительные тест-объекты. При отсутствии у последних повреждающего действия,говорят о нейтрализующем действии иммунной сыв и специфическом взаимодействии комплекса АГ-АТ.

4. Лабораторная диагностика холеры.

Испражнения, рвотные массы, желчь, патанатом материал, вода.

Бактериоскопический метод: мазки,окр по Граму и фуксином;препарат «висячая капля»;

Бактериологическое исследование: посев на щелочную пептонную воду или посев на чашки со щелочным питат агаром мазок,окр по Граму,подвижность;агглютинация на стекле с О-сыворотками;посев колоний на скошенный щелочной питательный агар(чист культура) характер колоний,мазок окр по Граму,гемолиз и гексаминовый тест,посев на «пестрый» ряд,подвижность,фаготипирование,развернутая реакция агглютинации с О-сыв и типовыми агглютинирующими сыв; нитрозоиндоловая проба-посев пленки –на чашку со щелочным питат агаром и вторично на щелочную пептонную воду характер колоний,мазок по Граму,посев на скошенный щелочной питат агар,реакция агглютинации с О-сыв и сыв Инаба и Огава;

Ускоренный метод: иммобилизация вирионов холерными сыв, ИФА.

5. Таксономическое положение и характеристика HIV.

Домен: Вирусы

Семейство: Ретровирусы

Род: Lentivirus

ВИЧ-РНК-содержащий вирус, имеет сферическую форму, двойная оболочка из липидов, пронизанная гликопротеинами. Липидная оболочка происходит из плазматической мембр клетки хозяина. Гликопротеиновая молекула состоит из 2х субъедениц: qp120 на поверхности вириона и qp41-пронизывает липидную оболочку. Сердцевина конусовидная, геном образуют две нити РНК, обратную транскрептазу(ревертазу). Жизненный цикл состоит из 4х стадий: адсорбция и проникновение вируса; высвобождение РНК,синтез ДНК-провируса и интеграция провируса с геномом хозяина; синтез РНК вируса,трансляция и формирование вирусных белков; сборка,созревание и высвобождение. Полностью реализуетя за 1-2 суток. Поражает Т- и В-лимфациты,нервные клетки,эпителиальные,эндотелиальныеи др.. культивируется на культуре кл Т-лимф и моноцитов чел., чувствительны шимпанзе. Выделяют два типа вируса:ВИЧ-1(более распространен),ВИЧ.

П БИЛЕТ № 35

1. Возрастные особенности микрофлоры человека. Влияние естественного и искусственного вскармливания на характер микрофлоры кишечника ребенка.

До рождения организма человек стерилен(плацентарный барьер матери), в эмбриональном периоде развития иммунные мех-мы защиты от микробов отсутствуют, а неспецефич еще находятся в зачаточном состоянии. Два критических момента в формировнии кишечного микробиоцеоноза:первый-при рождении ребенка, когда в течении первых суток начинается колонизация стерильного кишечника, второ-когда ребенок отлучается от грудного вскармливания. В ходе родов кожа и слизистые впервые соприкасаются с микрофлорой родовых путей матери,воздуха,рук медработников,вследствии этого кишечная МФ ребенка первых дней жизни представлена аасоциацией аэробов(в основн факультативных)-микрококки,энторококки,клостридии, стафилококки. К 4-5му дню жизни видовой состав фекальной МФ становится разнообразнее, появляются ассоциации неспорообразующих аэробов(бифидобактерии,пропионобактерии,пептококки,бактероиды, фузобактерии..), но доминирует аэробные бактерии-лактобациллы, кокки, дрожжевые грибки.

Дальнейшее формирование аутомикрофлоры ЖКТ в основном зависит от типа вскармливания. При грудном-у здорового доношенного ребенка уже в конце первой-начале второй недели жизни в микробоценозе толстой кишки за счет опережающих темпов роста отчетлево преобладают анаэробы(блее 95%). Оставшаяся часть –факультативные аэробы(лактобациллы, дрожжевые грибки, энтерококки, эпидермальный стафилококк). Это обусловлено действием комплекса стимуляторов роста бактерий в грудном молоке(бифидогенные факторы).

При искусственном вскармливании становление полноценной МФ кишечника существенно задерживается. Фактически вместо эубактерий(норм состава микробоценоза кишечника) формируется дисбиоз. Неблагоприятные последствия-недоразвитие бифидофлоры из-за дефицита бифидогенных факторов(только в нативном женском молоке).

Положение усугубляется отсутствием факторов местной антиинфекциооной защиты кишечника ребенка- сектерорного IgA,лактоферрина, лизоцима, лактоперидоксидазы, интерферона, лимфоцитов и макрофагов(только в женском молоке они все). Частота инфек заболев у таких детей в несколько раз выше, чем у вскормленных молоком матери.

2. Фагоцитирующие клетки организма. Стадии фагоцитоза.

Все фагоцитирующие клетки Мечников подразделил на макрофагов и микрофагов(полиморфноядерные гранулоциты-нейтрофилы,эозинофилы,базофилы). Макрофаги тканей сместе с моноцитами крови и их костномозговыми предшественниками (монодласты, промоноциты)- система мононуклеарных фагоцитов (СМФ). Все фагоцитирующие кл хар-ся общностью основных функций, сходством структур и метаболических процессов. Наружная плазматическая мембр всех фагоцитов является активно функционирующей структурой. Она отличается складчатостью и несет множество специфических рецепторов и АГ-меркеров, которые постоянно обновляются. Фагоциты снабжены высоразвитым лизосомальным аппаратом, в котором содержится богатый арсенал ферментов. Их мембраны способны к слиянию с мембранами фагосом или с наружной мембр. Функции: защитная(очистка организма от инф-х агентов,продуктов распада ткани..), представляющая(презинтация лимфациам антигенных эпитопов на мембране фагоцита), секреторная(секреция лизосомальных ферментов,БАВ).

Стадии фагоцитоза:

1.хемотаксис-целенаправленное передвижение фагоцитов в направлении хим градиентов в окружающей среде(наличие рецепторов на мембр для хемоаттрактантов).

2.адгезия-прикрепление, опосредовано рецептами.

3.эндоцитоз(фагоцитоз/пиноцитоз)-образование фагоцитирующей вакуоли(фагосомы)

4.внутриклеточное переваривание-происхолит в фагосомах, образование фаголизосом, преваривание микроба кислородзависимое,кислороднезависимое.

3. Феномен гемагглютинации и гемадсорбции и реакции их торможения.

Гемагглютинация-процесс склеивания и последующего осаждения эритроцитов крови; вызывается гемагглютининами, бактериями и вирусами, агентами, способными адсорбироваться на поверхности эритроцитов. При Г. образуются различимые глазом скопления эритроцитов в виде кучек, глыбок, комков. Г. определяется взаимодействием находящихся в эритроцитах агглютиногенов и плазмы, содержащей агглютинины. Различают активную Г., вызываемую непосредственным воздействием соответствующего агента на эритроциты, и пассивную Г., специфической иммунной сывороткой к антигену — предварительно адсорбированному эритроцитами. Г. может вызываться антителами, действующими против собственных эритроцитов (ауто-Г.) или против эритроцитов того же вида (гомо-Г.), а также полисахаридами бактерий туберкулёза, чумы….Торможение(РТГА)-подавление АГ вирусов АТми иммунной сыворотки, вирусы теряют св-ва агглютинировать эритроциты; применяют для диагностики вирусных болезней.

Гемадсорбция-процесс адсорбции эритроцитов на поверхности инфицированных вирусами клеток. Наблюдается в основном у вирусов, вирионы к-рых после образования выходят из клетки путем почкования, напр., у орто- и парамиксовирусов. Проводят для индикации вируса на чувствительной к нему к-ре клеток. Наблюдаются различия в типе адсорбции (диффузный, очаговый), виде сорбируемых эритроцитов (человека, обезьян, морской свинки и др.), температуре, при к-рой протекает реакция (37°С, 0°С), наличии элюции (есть, нет). Г. может быть заторможена предварительной инкубацией инфицированной вирусом к-ры клеток со специфической к вирусу антисывороткой. Реакцию торможения Г. используют для идентификации вирусов.

3. Лабораторная диагностика бруцеллеза.

Кровь(реже грудное молоко, желчь, костный мозг)

Бактериологическое исследование: посев на печеночный бульон посев на печеночный агар(хар-ка колоний,мазок окр по Граму;р-я агглютинации с противобруцеллезыми сыв) пересев в пробирку со скошенным агаром для получения чистой культуры(дифференцирование трех видов бруцелл по образованию H₂S,чувствительность к тионину,фуксину и фагам,в реакции агглютинации с монорецепторными сыв)

Биопроба: заражение морских свинок или белых мышей, вскрытие трупов(через 20-30дн после заражения),мазки-отпучатки из органов окр по Граму,посев на среды.

Сыв.крови-серодиагностика: РСК,РПГА,р-я Хеддлсона,р-я Райта, опсонофагоцитарная р-я.

4. Таксономическое положение и характеристика возбудителя болезни Боткина.

Домен: Вирусы

Отряд: Picornavirales

Семейство: Пикорнавирусы

Род: Hepatovirus

Вид: Hepatitis A virus

Однонитевая +РНК, размер вирусной частицы 27 нм, имеет наружную белковую оболочку – капсид, структурные и неструктурные белки, включая ферменты – хеликазу, РНК-полимеразу и протеазу.

Имеет 3 варианта генотипа. АТ к вирусу, вырабатываемые организмом, одинаковы при различных генотипах.

При t окружающей среды 200С в воде вирус сохраняется около 3 сут., на объектах окружающей среды, в фекалиях – несколько недель, в пищевых продуктах в условиях холодильника – несколько месяцев, при замораживании – несколько лет.

Вирус быстро инактивируется кипячением (5 мин.), мгновенно – автоклавированием, хлорсодержащие дезинфецирующие растворы инактивируют вирус через 15-30 мин., формалин – через 72 ч., перекись водорода, аналит и др. вещества – также в течение короткого времени.

П БИЛЕТ № 34

1. Взаимодействие фага с бактериальной клеткой.

1.адсорбция фага на бактериальной клетке при соответствии фаговых рецепторов,расположенных на конце отростка, с рецепторами бактер кл,связанными с клеточной стенкой. Некоторые фаги адсорбируютя на половых ворсинках (sex pili). На бактер,полностью лишенный клеточной, стенки адсорбции не происходит. Влияют рН,температура….

2.проникновение фага в бактер кл происходит путем инъекции НК через канал отростка. При этом в отличии от вирусов человека и животных капсидные белки головки и отростка остаются вне клетки. Некоторые фаги вводят свою ДНК без предкарительного повреждения клеточной стенки бактерий, другие-сквозь отверстие,пробуравленное с помощью лизоцима,содержащегося в их капсиде.

3.репликация фаговой НК и синтез фагоспецифических ферментов транскрипции и репликации. Время для формирования фагового потомства короче,чем у вирусов.

4.выход зрелых фагов из бактериальной клетки происходит путем «взрыва», во время которого зараженные бактерии лизируются. Лизис происходит участии фагового лизоцима либо без него.

2. Иммунологические взаимоотношения в системе мать-плод. Изоантигены эритроцитов АВО. Резус-антиген и его значение в патологии беременности.

Установлено,антиген А не является однородным и может быть разделен на 2 группы: А 1 (88%) и А2 (12%). Эритроциты группы А1 обладают сильно выраженной агглютинабильностью. Эритроциты группы А2 агглютинируются слабо и лишь при применении достаточно активных сывороток. При определении таких антигенов группа крови будет А2Я (П) и А2 В0 (1V).

Групповые анти-А, анти-В антитела, естественные,

холодовые, неполные, титр антител А2, как правило ниже титра антител А1.

Но у человека могут появляться и иммунные групповые антитела в

результате:

1. Парантерального поступления в организм несовместимых в групповом

отношении антигенов.

2. Изоиммунизация в процессе беременности в случае принадлежности плода

к группе крови, несовместимой с группой крови матери.

3. Парантерального применения некоторых лечебно-профилактических

препаратов, сывороток вакцин.

Иммунологические процессы при беременности в определенной мере исключительны: с одной стороны, в результате иммунологических взаимоотношений в организме матери вырабатываются иммунные факторы, обеспечивающие защиту и рост плода, с другой — активные иммунные тела материнского организма могут вызвать повреждение внутриутробного плода.

Проникновение в организм матери любых элементов тканей плода, имеющих индивидуальные специфические антигены (аллоантигены), побуждает ее иммунную систему к продукции антител на данные антигены, которые через плацентарный барьер могут попадать в кровоток плода. Наиболее часто встречается изоиммунизация к эритроцитам плода. Аллоантигенные свойства эритроцитов к настоящему времени изучены достаточно глубоко, описано более 250 эритроцитарных антигенов. Однако в акушерской практике ведущее значение имеют только некоторые из них. Важнейшая система эритроцитарных антигенов — система резус (Rh), которая представлена рядом аллелей D, C, E. Резус-отрицательная кровь также имеет особые антигенные свойства, в ней обнаружен фактор Нг, имеющий три разновидности — d, с, е. В настоящее время описано около 36 возможных генотипов системы Rh—Hr. Наиболее часто встречаются D-, Е-, С-антигены. В развитии иммунологического конфликта между материнским организмом и организмом плода основное значение имеет фактор D Наиболее важной системой антигенов эритроцитов следует считать систему АВО, антигены которой имеют ряд аллоспецифических вариантов. Антигены данной системы начинают формироваться у плода на ранних стадиях эмбрионального развития, однако окончательная их дифференцировка завершается в первые месяцы после Рождения. Эти антигены могут присутствовать не только в эритроцитах, но и в структурах других клеток крови и тканей организма.

Сложными антигенными свойствами отличаются лейкоциты. Особой антигенной структурой обладают отдельные компоненты лейкоцитарной клетки (ядро, цитоплазма, оболочка), различные группы лейкоцитов (агранулоциты, гранулоциты, моноциты). Весьма сложен и антигенный состав сывороточных белков. В настоящее время достаточно подробно изучены аллоантигенные системы иммуноглобулинов: Gm, Inv, Isf. Продолжается изучение антигенного спектра плазмы крови.Таким образом, как клеточные, так и плазменные компоненты крови человека имеют сложную антигенную структуру. Известно, что проникновение в кровоток матери любых элементов тканей-плода. обладающих собственной антигенной структурой, приводит к образованию антител. Иммунные антитела относятся к классам глобулинов М, G и А. Различают полные (солевые агглютинины) и неполные (агглютинирующие и блокирующие) антитела. Первые относятся обычно к IgM, вторые — к IgG и IgA. В развитии иммунологических повреждений плода основное значение имеют неполные антитела, поскольку они могут проникать через плаценту. Полные антитела с большой молекулярной массой в значительно меньшем количестве проникают через плацентарный барьер и поэтому играют второстепенную роль в развитии патологии. Тяжесть заболевания в основном зависит от вида антител, которые продуцируются иммунной системой организма матери.

Резус-АГ-это АГ,синтезирущийся предшественниками эритроцитов и обнаруживающийся на эритроцитах. По хим.структуре представляет собой термолабильный липопротеид. В зависимости от наличия или отсутствия резус-АГ различают резус+ и резус-.

При беременности «резус-отрицательной» матери «рузус-положительным» плодом может развиться «резус-конфликт». Это патологическое состояние связано с выработкой антирезусных АТ, способных вызывать иммунологический конфликт: невынашивание беременности или желтуху новорожденного.

3. Модификации реакции агглютинации.

РА-при которой происходит связывание АТми корпускулярных АГ(бактерий, эритроцитов или других клеток..). она протекает при наличии эликтролитов, н-р при добавлении изотонического раствора NaCl.

Развернутая РА-для определения АТ у больного; к разведениям сывоторки крови больного добавляют диагностикум(взвесь убитых микробов) и через неск чесов инкубации при 37⁰С отмечают наибольшее разведение сыворотки,при котором произошла агглютинация(образовался осадок).

Ориентировочная РА-определение возбудителя у больного;применяют диагностические АТ(агглютинирующую сыв)-проводят серотипирование возбудителя;проводят на предметном стекле, к капле диагностической агглютинирующей сыв в разведении1/10 или 1/20 добавляют чистую культуру возбудителя, рядом ставят контроль-вместо сыв больного наносят каплб р-ра NaCl. При появлении в первом хлопьевидного осадка ставят Развернутую РА в пробирках с увеличивающимися разведениями агглютинирующей сыв.

РНГА(РПГА)-использование эритроцитов с адсорбированными на их поверхности АТ или АГ, взаимодействие которых с соответствующими АТ или АГ сыв крови больных вызывает склеивание и выпадение эритроцитов на дно.(при отрицат-пуговка)

РТГА-подавление АГ вирусов АТ иммунной сыв, в результате чего вирусы теряют св-ва агглютинировать эритроциты; применяют для диагностики многих вирусных инфекций..

РА для определения групп крови, для определения русус-фактора, для определения антирезусных АТ.

4.Лабораторная диагностика туляремии.

Содержимое бобунов, кровь, органы животных

Бактериоскопическое: мазок окр по Граму;

Биопроба и бактериологическое исследование: заражение морской свинки,вскрытие трупа,мазоки окр по Граму и Романовскому-Гимзе,посевы на свернутую желточную или другие среды(хар-р роста,мазок по Граму,реакция агглютинации с противотуляремийной сыв)

Сыворотка крови-серодиагностика: РПГА,развернутая реакция агглютинации.

Больной человек-кожно-аллергическая проба с тулярином.

5. Характеристика семейства ретровирусов, вызываемые заболевания.

Однонитевые РНК-содержащие, обратнотранскрибирующие, имеют сферическую форму. Вирион имеет оболочку и нуклеокапсидную сердуевину. Капсид икосаэдрический, наличие обратной транскриптазы, связанной с геномом в виде комплекса из двух идентичных субъединиц. Вируси содержат протеины: группового АГ (gag), полимеразный протеин (pol), белки оболочки(env). Семейство включает семь родов: Alpharetrovirus, Betaretrovirus… В патологии человека значение имеют 4 вида: ВИЧ-1, ВИЧ-2 и вирусы Т-клеточных лейкозов(HTLV-1, HTLV-2).