Самостоятельная работа студентов. 1. Иммуноферментный анализ (ИФА - демонстрация). Антигены вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) адсорбированы на дне лунок по­листироловой пластины

1. Иммуноферментный анализ (ИФА - демонстрация). Антигены вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) адсорбированы на дне лунок по­листироловой пластины. В лунки внесены исследуемые образцы сывороток крови. Контроли: 1 - эталонная сыворотка с антителами против ВИЧ (положительный контроль), 2 - сыворотка, не содержащая антител ВИЧ (отрицательный контроль). Реакция проходит при 37⁰ С в течение I часа. После отмывки во все лун­ки вносят сыворотку против иммуноглобулинов человека, меченую ферментом (пероксидаза хрена), выдерживают 1 час при 37⁰, после чего вновь отмывают. Во все лунки вносят перекись водорода, которая расщепляется пероксидазой и индикатор (ортофенилендиамин), изменяющий свой цвет в результате химической реакции. Учет ре­акции производят на специальном (вертикальном) спектрофотометре. Положительный контроль характеризуется окра­шиванием среды в лунке в красно-коричневый цвет, так как в эталонной сыворотке содержались антитела к ВИЧ, вступившие в реакцию с антигенами, адсорбированными на дне лунки пластины. При добавлении меченой пероксидазой сыворотки против иммуногло­булинов человека антитела меченой сыворотки соединяются с антителами эталонной сыворотки и после второй отмывки также остаются в лунке. Поэтому в лунке контроля 1 произошла выраженная химическая реакция. Контроль 2 - бес­цветный, так как в сыворотке, внесенной в эту лунку, не со­держались антитела к ВИЧ- вирусу, поэтому в этой лунке не произошло цветной реакции с сывороткой против иммуноглобулинов человека, меченой пероксидазой. Интенсивность окраски в опытной лунке зависит от уровня антител к ВИЧ в исследуемой сыворотке,

2. Радиоиммунный анализ (РИА - демонстрация). Сущность РИА сходна с ИФА, однако сыворотку про­тив иммуноглобулинов человека метят не ферментом, а радиоактивным изотопом (Н³- тритием, С¹⁴, I¹²⁵, и т.д.).Результаты реакции учитывают с помощью д. и д. анализаторов. Студенты знакомятся с оборудованием для РИА.

3. Иммунофлюоресцентный метод (ИФМ - демонстрация). Антитела против антигенов вирусов и бактерий за счет ковалентных связей метят флюоресцирующим веществом (чаще всего изотиоцианатом флюоресцеина). Готовят микропрепараты на предметных стеклах из материала от больного (смыв из носоглотки, отделяемое бубона, мазки-отпечатки из трупного материала и т.д.) и обрабатывают их флюоресцирующей сывороткой. Если в микропрепаратах имеются антигены соответствующие антителам флюоресцирующей сыворотки, то антитела соединяются с ними и при люми­несцентной микроскопии образовавшиеся комплексы будут светиться. Эта модификация ИФМ называется прямой. При непря­мом ИФМ микропрепарат обрабатывают сначала обычной сывороткой против определенного антигена, а затем - антиглобулиновой флюоресцирующей сывороткой. Метод иммунофлюоресценции широко применяется для диагностики различных инфекций, в частности, гриппа и острых респираторных вирусных заболеваний. Студенты микроскопируют и зарисовывают клетки цилиндрического эпи­телия носоглотки человека, пораженные вирусом гриппа (прямой метод иммунофлюоресценции).