Техника окраски по Граму

· карболовый генциан-виолет – 1 - 2 мин. (на полоски фильтровальной бумаги, пропитанные раствором генциан-виолета и высушенные, наносят несколько капель воды);

· краску сливают, не промывая водой, наносят раствор Люголя на 1 мин. При этом мазок чернеет;

· раствор Люголя сливают, обрабатывают препарат спиртом в течение 30 сек., слегка покачивая мазок (до прекращения отхождения лиловых струек);

· немедленно промывают мазок водой;

· докрашивают препарат водным фуксином в течение 1 - 2 мин;

· мазок промывают, высушивают, микроскопируют.

Способность бактерий различно окрашиваться по методу Грама, обусловлена различиями структуры и химического состава бактериальной клетки, прежде всего, оболочки. В зависимости от результатов окраски все микроорганизмы делят на две группы — грамположительные и грамотрицательные.

Грамположительные (Bacillus cereus, Staphylococcus aureus и др.) бактерии окрашиваются в сине-фиолетовый цвет, т.к. их оболочечные структуры связывают и прочно удерживают комплекс генциан-виолета с йодом, не обесцвечивающийся спиртом. Грамотрицательные бактерии (Escherichia coli) окрашиваются в светло-красный цвет, поскольку их оболочка неспособна формировать и удерживать комплекс генциан-виолета с йодом, легко обесцвечиваясь спиртом.

При окраске бактерий по методу Грама необходимо учитывать следующие обстоятельства:

· возраст культуры имеет существенное значение, так как в "старых" культурах тинкториальные свойства бактерий могут быть изменены;

· мазок должен быть тонким и равномерным;

· не рекомендуется подвергать препарат форсированной горячей сушке;

· окрашивать можно лишь полностью остывший препарат.

Изучение морфологических и тинкториальных свойств микроорганизмов в препаратах, приготовленных из материала от больного, лежит в основе бактериоскопического метода исследования. Этот метод широко используется в диагностике чумы, туберкулеза, гонореи, сифилиса и ряда других заболеваний.

7. Ознакомление с морфологией и тинкториальными свойствами (отношение к окраске по Граму) различных видов бактерий (микроскопия демонстрационных препаратов). Промикроскопировать, описать и зарисовать следующие микропрепараты;

1. Стрептококки (Streptococcus pyogenes) - рис. 1. Грамположительные шаровидные микробы, располагающиеся в виде цепочек.

2. Стафилококки (Staphylococcus aureus) – рис. 2. Грамположительные шаровидные микробы, располагающиеся в виде гроздьев винограда.

3. Кишечная палочка. (Esherichia coli) – рис. 3. Грамотрицательные палочковидные бактерии с закругленными концами, расположенные беспорядочно.

4. Вибрионы холеры (Vibrio cholerae) – рис.4. Грамотрицательные бактерии в виде запятых.

5. Стрептобациллы (Bacillus cereus) - рис. 5. Окрашиваются по Граму положительно, имеют форму палочек, концы которых обрублены. Образуют цепочки, в теле микробной клетки могут быть видны неокрашенные участки спор. По морфологии напоминают возбудитель сибирской язвы. Препараты описать и зарисовать.

По окончании работы пробирки с культурами и демонстрацион­ные мазки сдаются дежурным группы и возвращаются на лаборантский стол. Микроскопы ставят в нерабочее положение и сдают лаборанту кафедры. Воду из тазиков выливают вбак, рабочий стол протирают дезинфицирующим раствором. В конце занятия проводится дезинфекция и мытье рук. Тетрадь с записями и зарисовками, сделанны­ми в ходе занятия, представляется преподавателю на подпись.

8. Знакомство с бактериоскопическим методом диагностики инфекционных болезней. Бактериоскопический метод осно­ван на изучении морфологических и тинкториальных особенностей бактерий в препаратах, приготовленных из материала от больного. Метод широко используется в диагностике чумы, туберкулеза, гонореи, сифилиса и ряда других заболеваний.