ИФА — иммуноферментый анализ

Применяется для диагностики многих заболеваний: ВИЧ, гепатитов и т. д. Реакция высокочувствительная, хотя могут быть сбои в сторону завышения положительных результатов. Ставится в лунках полистироловых планшетов, на поверхности которых адсорбированы определенного вида антитела или антигены. ИФА напоминает «сэндвич» так так участвующие компоненты располагаются послойно друг на друге.

Алгоритм:

1. В лунки внести исследуемую сыворотку. Поставить планшеты на 60 минут в термостат.

2. Отмыть лунки специальным раствором

3. Во все лунки добавить конъюгат (А белок золотистого стафилококка, меченый пероксидазой хрена). Термостатирование 35 мин.

4. Отмыть лунки планшета.

5. Во все лунки добавить ОФД (отрофенилендиамин) с гидроперитом. Выдержать 15-20 минут при комнатной температуре в темном месте. За это время проходит ферментативная фаза реакции: если конъюгат связан комплексом АГ+АТ, то гидроперит будет разрушаться пероксидазой хрена до перекисных соединений, которые действуют на ОФД и в лунках появляется окрашивание различной степени интенсивности — от светло-коричневого до интенсивно-коричневого. Интенсивность окраски зависит от объема образовавшегося осадка (комплекса АГ+АТ).

6. В лунки добавить 1 мл серной кислоты для прекращения ферментативной реакции. Плашку сразу поместить в спектрометр для определения оптической плотности растворов. Спектрофотометр распечатывает на ленте оптическую плотность всех рабочих растворов и контролей. Для окончательного учета необходимо рассчитать оптическую плотность критическую.