Методы выделения анаэробных бактерий

Знать:

1. Забор исследуемого материала для выделения анаэробов

2. Условия культивирования анаэробов

3. Методы культивирования анаэробов

4. Питательные среды для анаэробов

Уметь:

1. Провести первичный посев исследуемого материала:

- на среду Китта-Тароцци

- на среду Вильсона-Блера

- методом Виняла-Вийона

- методом Штурм

План работы:

1. Особенности культивирования анаэробов

2. Метода культивирования анаэробов

3. Питательные среды

4. Методы выделения анаэробов

В зависимости от типа дыхания бактерии делятся на аэробные (облигатные аэробы — окислительный тип дыхания (кислородом) и факультативные анаэробы — окислительный тип дыхания и ферментативный тип дыхания (без кислорода), а также облигатные анаэробы — ферментативный тип дыхания (без кислорода).

К возбудителям анаэробных инфекций относятся:

1. Гр+ спорообразующие анаэробные палочки — клостридии столбняка, газовой гангрены, ботулизма.

2. Неспорообразующие анаэробные кокки — вейллонеллы, бактероиды, пептококки, пептострептококки — обитатели кишечника человека.

Для обеспечения бескислородных условий взятие материала производят шприцом с притертым поршнем до полного его заполнения и вытеснения воздуха. Затем шприц надевают на иглу, вставленную через резиновую пробку в пробирке со смесью инертных газов (кислорода нет) и вводят в нее исследуемый материал, который доставляют в лабораторию.

Особенностью культивирования анаэробов является их выращивание на бескислородных питательных средах и в бескислородной атмосфере. Для удаления кислорода из питательных сред используют физические, химические и биологические методы.

Физические методы удаления кислорода основаны на механическом удалении кислорода.

1. Использование анаэростатов (прибор, создающий вакуум) для выращивания анаэробов — туда помещают чашки с посевами, создают бескислородные условия, а затем анаэростат помещают в термостат. При отсутствии анаэростата чашки помещают в экикатор, ставят на дно зажженную свечу для поглощения кислорода, закрывают эксикатор герметичной крышкой и ставят в термостат.

2. Культивирование анаэробов в высоком столбике агара — на дне пробирки создаются бескислородные условия. Посев делают уколом. После посева пробирку быстро охлаждают под струей холодной воды для предотвращения поглощения средой кислорода.

3. Культивирование анаэробов в жидкой среде Китта-Тароцци. Перед посевом жидкую среду регенерируют (удаляют кислород путем ее кипячения на водяной бане 20 минут). После посева среду резко охлаждают под струей холодной воды (для предотвращения поглощения кислорода). Поверхность среды заливают вазелиновым маслом для защиты от кислорода воздуха и закрывают резиновой пробкой.

4. Метод Виньяла-Вийона — исследуемый материал, помещенный в пробирку, заливают расплавленным агаром, а затем засасывают смесь во весь объем пастеровской пипетки. Запаивают пипетку с обеих концов и помещают в термостат. Колонии, выросшие в толще агага, извлекают после распиливания пастеровской пипетки.

5. Метод Штурм — исследуемый материал вносят в крышку чашки Петри и заливают расплавленным горячим агаром на ¼ объема и закрывают дном чашки, так, чтобы агар залеплял зазор между крышкой и дном.

Химические методы удаления кислорода основаны на использовании химических веществ для удаления кислорода. Для этого в состав питательных сред вводят редуцирующие вещества, т. е. вещества, поглощающие кислород из среды. К ним относят глюкозу, кровь, тиогликолевую кислоту, кусочки печени.

Биологические методы удаления кислорода. Метод Фортнера — в чашку Петри, разделенную желобком на две части засевают аэробную и анаэробную культуры. Сначала растут аэробы, поглощая при этом кислород, а затем в бескислородных условиях начинают расти анаэробы.