Пртокол-очет № 24, от 4 октября 2008, --

Тема: Микологическая диагностика кандидоза СОПР. Цель Метод и его содержание Полученные результаты Выводы Определить морфологические свойства   Накопить, выделить культуру, с целью ее идентификации     Определить чувствительность к противогрибковым препаратам, с целью рациональной терапии   Определить биохимические свойства, с целью идентификации вида дрожжеподобных грибов   Микологическое исследование обследуемого с подозрением на кандидоз ротовой полости 1 этап. Готовится нативный препарат «раздавленная капля» - на предметное стекло наносится 1 капля исследуемого материала и 1 капля двойного раствора Люголя, накрывается покровным стеклом и микроскопируется с объективом х90.   2 этап. Посев исследуемого материала на среду Candi-select(Bio-Rad, Sanofi Diagnosticts Pasteur). Селективная среда, содержащая питательную основу для роста грибов, хромогенный субстрат для определения N-ацетил b-D-галактозамидазы C. albicans и два антибиотика, хлорамфеникол и гентамицин, которые подавляют рост бактериальной микрофлоры. Идентификация C. albicans, основана на выявлении ее специфического фермента N-ацетил b-D-галактозамидазы, который гидролизуя хромогенный субстрат, приводит к окрашиванию колоний в голубой цвет.   3 этап. Определение чувствительности исследуемой культуры к противогрибковым препаратам с помощью микропанели FUNGITEST. FUNGITEST используется для определения чувствительности грибов к 6 противогрибковым препаратам в 2-х различных концентрациях на специальной питательной среде, содержащей индикатор, который, в случае роста грибов, меняет цвет с голубого на красный. Когда рост грибов задерживается за счет противогрибковых препаратов, среда остается синей. Микропанель состоит из 16 микролунок, содержащих: Т⁺ - положительный контроль роста; Т^- - отрицательный контроль роста; лунки с 6-ю противогрибковыми препаратами в 2-х различных концентрациях. 4 этап. Тест-система AUXACOLOR для биохимической идентификации дрожжеподобных грибов. Тест-система AUXACOLOR (Bio-Rad, Sanofi Diagnosticts Pasteur) основана на использовании сахаров, а также определения актидион-резистентности и фенолоксидазной активности дрожжеподобных грибов. Планшетка, после внесения в лунки суспензии культуры, инкубируется в течение 24-48 ч при t 30°С (± 2°). Рост грибов учитывается по изменению цвета индикатора с розового на синий при утилизации углеводов, с голубого на розовый или бесцветный – при определении актидион-резистентности и с бесцветного на зеленый или черный – фенолоксидазы.

Виды Субстрат	C. albicans	C. tropicalis	C. kefyr (pseudotropicalis)	C. krusei	C. parapsilosis	C. glabrata
Глюкоза - GLU	+	+	+	+	+	+
Мальтоза - MAL	+	+	-	-	+	-
Сахароза - SUC/SAC	+	+ (-)	+	-	+	-
Галактоза - GAL	+	+	+	-	+	-
Лактоза – LAC	-	-	+	-	-	-
Раффиноза – RAF	-	-	+	-	-	-
Инозитол – INO	-	-	-	-	-	-
Целлобиоза – CEL	-	- (+)	-	-	-	-
Трегалоза – TRE	+	+	-	-	+ (-)	+
Адонитол – ADO	V	+	- (+)	-	+ (-)	-
Мелезитоза – MEL	- (+)	+	-	-	+ (-)	-
Ксилоза - XYL	+	+	V	-	+ (-)	-
Арабиноза – ARA	- (+)	-	V	-	+	-
Актидион - ACT 24ч 48/72ч	+ (-) +	- V	+ (-) + (-)	- -	- -	- - (+)
Фенолоксидаза - POX	-	-	-	-	-	-

Примечание: + тест положителен для 99% штаммов;

- тест отрицателен для 99% штаммов; V вариабельный тест;

+ (-) тест положителен для 95% штаммов или замедленная экспрессия теста (48 или 72 ч); - (+) тест отрицателен для 95% штаммов.

  Микологическое исследование обследуемого с подозрением на кандидоз ротовой полости 1 этап. Определение морфологических свойств При микрокопировании препарата выявлены многочисленные клетки округлой и овальной формы.     2 этап. Накопление, выделение, идентификация культуры На среде Candi-select обнаружены характерные выпуклые, врастающие в среду колонии голубого цвета, (более 60 колоний). В мазке обнаружены округлые и овальные, одиночные и почкующиеся клетки, окрашенные по Граму в фиолетовый цвет, наличие псевдомицелия, в виде нитей, образованных из длинных тонких клеток, без общей оболочки и перегородок   3 этап. Определение чувствительности к противогрибковым препаратам 5-флюороцитозин – чувств. амфотерицин В – чувств. Миконазол – чувств. кетоконазол (низорал) – устойчив. итраконазол (орунгал) – умеренно-устойчив. флюконазол (дифлюкан) – чувств. При достоверных контролях 4 этап. Биохимические свойства, идентификация вида

Глюкоза - GLU	+
Мальтоза - MAL	+
Сахароза - SUC/SAC	+
Галактоза - GAL	+
Лактоза – LAC	-
Раффиноза – RAF	-
Инозитол – INO	-
Целлобиоза – CEL	-
Трегалоза – TRE	+
Адонитол – ADO	-
Мелезитоза – MEL	-
Ксилоза - XYL	+
Арабиноза – ARA	-
Актидион - ACT	+
Фенолоксидаза - POX	-