Тема 2. Практическое занятие. Амплификация ДНК методом полуколичественной полимеразной цепной реакции

Практическое занятие. Амплификация ДНК методом полуколичественной полимеразной цепной реакции. Подбор праймеров и требования к ним. Анализ результатов ПЦР, гель-электрофорез и его физико-химические основы, маркеры молекулярного веса, покраска и визуализация. Денситограма. Рестрикционный анализ, типы рестриктаз и их специфичность, определения полиморфизма генов методом оценки длины рестрикционных фрагментов.

Тема 3.

Практическое занятие. Выделение тотальной РНК из тканей и клеток крови, оценка чистоты и концентрации.

Тема 4.

Практическое занятие. Обратная транскрипция. ПЦР в реальном времени, одно и двуступенева ПЦР. Система ПЦР-детекции, ДНК-связывающие красители. Primer-based detection system. Probe-based detection system. Технологии анализа результатов ПЦР: амплификацийна кривая, сравнительная baseline, threshold, threshold cycle (ct) value. Кривая плавления и ее анализ. Калибровочная кривая.

Использование референсных красителей (ROX, fluoresceine). Внутренний контроль и референсные гены.

Тема 5.

Практическое занятие. Выделение ДНК и бисульфитное конверсия для анализа метилирования ДНК.

Тема 6.

Практическое занятие. Выделение хроматина для анализа ацетилирования гистонов.