А. Биуретовая реакция на пептидную группу (реакция Пиотровского)

Принцип метода. Все белки при обработке солями меди в щелочной среде образуют хелатный (клешневидный) комплекс фиолетового цвета с красным или синим оттенком (в зависимости от числа пептидных связей в белке), что является универсальной качественной реакцией на белки, которая называется биуретовой реакцией. Своё название эта реакция получила от производного мочевины биурета (лат.bi дву-, двух + urea мочевина; синоним карбамоилмочевина H₂N – CO – NH – CO – NH₂), который даёт такую же реакцию. Положительную биуретовую реакцию дают органические соединения, имеющие не менее двух пептидных связей, т.е. начиная с трипептидов все олигопептиды, полипептиды и белки. Полагают, что образование окрашенных комплексов с ионами меди происходит вследствие того, что пептидные связи подвергаются в щелочной среде кетоенольной таутомеризации:

Водород енольной группы при этом легко отщепляется, в результате чего медь присоединяется к атому кислорода. Кроме того, ион меди образует комплекс с четырьмя атомами азота, входящими в пептидные связи и имеющими свободные электронные пары, образуя с НИИ координационные связи.

Ход работы. В пробирку наливают около 1 мл раствора белка, 1-2 мл 10%-ного раствора гидроксида натрия и 1-2 капли раствора сульфата меди(II). При взбалтывании постепенно развивается фиолетовое окрашивание.

Результат:

Вывод: