| Реакция преципитации
Феномен прецепитации – эффект укрупнения растворимых антигенных субстанций (преципитиногенов) под влиянием антител (преципитинами) с возникновением помутнения прозрачных растворов.
Выпадение нерастворимого комплекса антиген + антитело в виде осадка наблюдается лишь при эквивалентных соотношениях ингредиентов. Реакция преципитации служит для выявления антигена по известной преципитирующей сыворотке, содержащей антитела; сыворотку получают иммунизацией животных соответствующим антигеном.
А. Для постановки реакции кольцепреципитации в узкие пробирки диаметром 0,5 см наливают по 0,1 мл диагностических сывороток против различных антигенов микробного или иного происхождения (число пробирок по числу имеющихся ингредиентов), а затем осторожно по стенке пробирок наслаивают пастеровской пипеткой изучаемый материал. Учет реакции производят через 1-2 минуты. В случае положительной реакции на границе между сывороткой и исследуемым материалом появляется преципитат в виде белого кольца. В контролях преципитата нет.
Б. Реакция преципитации в геле позволяет проводить анализ сложного набора растворимых антигенов или преципитирующих антител в испытуемых системах. Принцип метода заключается в том, что антиген и антитело, реагируя в геле, образуют преципитат, который проявляется в виде линии белого цвета. Каждая пара антиген + антитело образует независимую линию преципитации, что позволяет сравнивать антигенный состав испытуемых веществ.
В зависимости от техники постановки различают:
1. Метод простой (одинарной) диффузии, при котором готовится слой агарового геля, смешанный с иммунной сывороткой и в лунку, сделанную в этом слое, вносится антиген.
2. Метод двойной диффузии по Оухтерлони, при котором антигены и антитела вносятся в разные лунки агарового геля и диффузируя в среду, встречаются, образуя линии преципитата. Для постановки реакции по данному методу чашки заливают просветленным агаром, в котором делают лунки на равном расстоянии друг от друга.
3. В центральную лунку вносят антитела, в лунки по периферии – испытуемые антигены или один и тот же антиген в различных разведениях. Чашку закрывают крышкой и оставляют опыт при комнатной температуре на 24 - 28 часов.
Возможны следующие виды результатов:
1. Реакция идентичности: полосы преципитации, образованные антигенами ²А² и ²В² и антисывороткой, сливаются друг с другом – сравниваемые антигены серологически тождественны.
2. Реакция неидентичности: полосы преципитации перекрещиваются: сравниваемые антигены серологически различны.
3. Реакция частичной идентичности: полосы преципитации в основном сливаются, но образуют остаток (²шпора²), что указывает на содержание антител как к общим детерминантам сравниваемых антигенов, так и к детерминантам, отсутствующих у одного из них.
|
Задание 5. Поставить РСК с сывороткой обследуемого больного
| Ингредиенты, мл
| Пробирки
|
|
|
|
|
|
|
|
|
| Испытуемая сыворотка, 1:5
| 0,2
| -
| -
| 0,2
| -
| -
| -
|
| Положительная сыворотка
| -
| 0,2
| -
| -
| -
| -
| -
|
| Отрицательная сыворотка
| -
| -
| 0,2
| -
| -
| -
| -
|
| Антиген
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| -
| 0,2
| -
| -
|
| Физиологический раствор
| -
| -
| -
| 0,2
| 0,2
| 0,4
| 0,8
|
| Комплимент
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| -
|
| Инкубация при 37 ОС – 30 мин
|
| Гемолитическая система
| 0,4
| 0,4
| 0,4
| 0,4
| 0,4
| 0,4
| 0,4
|
| Инкубация при 37 ОС – 30 мин
|
| Результат
|
|
|
|
|
|
|
|
| Заключение:
Объяснить результаты, полученные в каждой из 7 пробирок:
־ почему произошел или не произошел лизис эритроцитов;
־ на основании каких данных судят о положительной или отрицательной реакции.
|
Задание 6. Постановка реакции коагглютинации по схеме
| Получают взвесь выделенной культуры
| Вносят штамм Cowan – 1
| Положительная агглютинация говорит о хронической инфекции
|
