Методические указания к практическому заданию 6

Метод определения гиалуронидазы Готовится гиалуроновая кислота из пупочных канатиков. Для этого свежие пупочные канатики очищаются от крови, разрезаются, освобождаются от сосудов, измельчаются ножницами, взвешиваются, заливаются двойным количеством воды и варятся до оседания кусочков на дно (до кипения не доводить). Раствор пропускают через марлевый фильтр. Фильтрат является гиалуроновой кислотой. 2 млрд взвесь суточной агаровой культуры бактерий разливается в пробирки, добавляется рабочее количество гиалуроновой кислоты. Объем жидкости доводят до 1 мл физратвором. Добавляется по 3 капли 15 % уксусной кислоты. Ингредиенты осторожно смешивают и учитывают результат. С уксусной кислотой гиалуроновая кислота должна давать сгусток. Если штамм продуцирует гиалуронидазу высокой активности, муциновый комочек образуется только в шестой пробирке (контроль). В опытных пробирках жидкость будет равномерно мутной. Если активность фермента невелика, то образование сгустка наблюдается только в первых 2-х или 3-х пробирках. При отрицательной реакции во всех пробирках образуются сгустки

Задание 7. Определение нейраминидазной активности микробов

־ Культуральная жидкость 72-х часовой бульонной культуры синегнойной палочки заливается по 0,2 мл в пробирки, добавляется по 0,4 мл смеси овомуцина (яичный белок) пополам с фосфатным буфером 0,1 М рН 6.0.

־ После одночасового инкубирования в термостате при t 37⁰ С, в пробирки вносят по 0,4 мл 4,0 % арсенита Na в 0,5 н растворе серной кислоты. Смесь встряхивают до исчезновения желтой окраски.

־ Затем добавляют по 0,3 мл 0,1 М раствора тиобарбитуровой кислоты, рН 9,0 и пробирки помещаются в кипящую водяную баню на 5 - 7 мин, охлаждаются на льду и в каждую из них вносится по 5 мл бутанола.

־ Появляющееся интенсивное окрашивание смеси свидетельствует о наличии нейраминидазы.

־ Сделать заключение по заданию.

Задание8. Определить проявление действия микробных токсинов:

־ Демонстрация и определение гемолитического действия, вызываемого стафилококками, стрептококками, кишечной палочкой на кровяном агаре.

־ Столбнячного, ботулинического экзотоксина на мышах (демонстрация на таблицах и слайдах).

־ Сделать заключение по заданию.

Задание 9. Определить лизоцимную активности бактерий

־ Взвесь миллиардной суточной культуры Micrococcus 0,2 мл засевают в слой 0,7 % питательного агара в чашке Петри.

־ На поверхность подсушенного агара (с микрокок­ком) петлей в виде бляшек наносят суточные культуры исследуемых штаммов. На одну чашку засевают до 9 исследуемых штам­мов.

־ Посевы инкубируют в термостате в течение 24 ч при 37 °С.

־ Учитывают наличие зон лизиса микрококка вокруг колонии исследуемой культуры с помощью бинокулярной лупы в мм.

־ Сделать заключение