Тема: Микробиологическая диагностика дифтерии

Задача №1. Определение уровня противодифтерийного (антитоксического) иммунитета.

С цель ревакцинации ребенка 16 лет ему провели определение уровня противодифтерийного (антитоксического) иммунитета, для этого использовали РПГА.

Ход РПГА:

1. Эритроциты сентибилизированныеанатоксином вносят в лунки с сывороткой обследуемого

2. Инкубация (37⁰С, 2ч.)

3. Учет + - зонтик, - - пуговка КЭ – контроль несенсибилизированных эритроцитов (на отсутствие спонтанной агглютинации, КА – контроль сенсибилизированных эритроцитов.

Результат реакции:

1/10	1/20	1/40	1/80	КЭ	КД
Тд – 1/20, отсутствие агглютинации свидетельствует о низком тире антитоксических АТ.

Вывод:

Задача №2. Диагностика носительства возбудителей дифтерии

При поступлении на работу в ясли –сад воспитатели были обследованы на носительство дифтерийной палочки.

Ход исследований:

1. Посев материала из зева на кровяно-теллуритовый агар
2. Приготовление препарата из выбранных колоний
3. Окраска по Граму
4. Микроскопия х90

Если результаты подозрительны:

1. Окраска по Нейссеру
2. Микроскопия препарата
3. Посев на сывороточно-теллуритную среду

Результаты:

1. Опишите результат посева:

2. Опишите культуру при микроскопии

В поле зрения видны….

Сделайте вывод.

Задача №3

В стационар поступил ребенок 10 лет с диагнозом дифтерия. Через 5 дней в поликлинику обратились 4 его одноклассника. У всех наблюдали следующие симптомы: головная боль, боли в животе, затруднение при глотании, усталость, снижение аппетита, незначительное повышение температуры, увеличенные небные миндалины. Для уточнения диагноза были проведены следующие анализы:

1. Мазок из зева, окраска по Граму.

Просмотрите под микроскопом предложенные на занятии микропрепараты и электронные фотографии возбудителя дифтерии. Зарисуйте, укажите метод окраски, тип микроскопии, увеличение.

1. Посев материала из зева на кровяно-теллуритовый агар
2. Отбор подозрительных колоний (опишите какие колонии на Ваш взгляд подозрительные) для этого проводят визуальный осмотр колоний в проходящем и отраженном свете.через 12 и 24 ч.культивирования (37⁰С)

Колонии:__________________________________________________________________

1. Выделение чистой культуры
2. Накопление культуры на на сывороточно-теллуритной среде.
3. Окраска культуры по Нейссеру (опишите методику)

Окраска по Нейссеру: _______________________________________________________

1. Микроскопия х90. Опишите препарат.
2. Окончательная идентификация по биохимическим свойствам: определение ферментов цистиназы (проба Пизу), уреазы (проба Закса), способность расщеплять до кислоты глюкозу, сахарозу, крахмал.

Результат биохимического исследования: все культуры проявили одинаковую

биохимическую активность:

Проба Пизу +

Глюкоза К+ Г –

Сахароза К- Г –

Крахмал К+ Г –

Проба Закса –

1. Определение токсигенных свойств коринебактерий с помощью реакции преципитации в геле

Ход исследования:

Культуру засевают в виде «бляшек» диаметром 0,6-0,7 см на расстоянии 0,7-0,8 см друг от друга и 0,5 см от края полоски фильтровальной бумаги. На одну чашку следует засевать не более 10 «бляшек». Из них 6 «бляшек» испытуемой культуры, 4-контрольного штамма. При небольшом количестве испытуемого материала засевают 6 контрольных «бляшек» и 4 – испытуемых. Чашки с посевом помещают в термостат при 37 град. C.

Учет результатов

Результат учитывают через 18-24 часа и 48 часов роста.

№4 К+

№3 К-

№2 №1

Объясните механизм образования полосок.

Сравните полученные данные по идентификации культуры с таблицей№1. Определите

к какому роду, виду и биотипу относятся выделенные возбудители.

Таблица 1

БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА НЕКОТОРЫХ ВИДОВ КОРИНЕБАКТЕРИЙ

(ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ДИФТЕРИЙНОЙ ИНФЕКЦИИ. МЕТОДИЧЕСКИЕ

УКАЗАНИЯ. МУ 4.2.698-98 (УТВ. МИНЗДРАВОМ РФ 09.01.98))

Вид корине бактерий -	Токси генные свойст-¦ ва	Разложение
цистина	глюкозы	сахарозы	крах- мала	моче вины -	нитра тов
C.diphtheriae вариант gravis	+/-	+	+	-	+	-	+
C.diphtheriae вариант mitis	+/-	+	+	-	-	-	+
C.ulcerans	+/-	+	+	-	+	+	-
C.pseudo tuberculosis (C.ovis)	+/-	+	+	-	-	+	-(редко+)
C.pseudo diphtheriticum (C.hofmani)	-	-	-	-	-	+	+ (редко-)

Окраска гранул волютина методом Нейссера включает три этапа.

1. Фиксированный мазок окрашивают уксуснокислым метиленовым синим 1 мин, сливают краситель и промывают мазок водой.

2. Наливают раствор Люголя на 20 — 30 с, после чего сливают раствор.

3. Окрашивают препарат везувином 1 — 3 мин, после чего промывают водой и высушивают.