Вопрос: Реакции с использованием меченых антител или антигенов

1) Реакция иммунофлюоресценции-РИФ (метод Кунса)- основана на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, мечеными флюорохромами, способны светиться в УФ- лучах люминесцентного микроскопа (прямой метод)

Бактерии в мазке, обработанные такой специфической сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета. Различают три основных разновидности метода: прямой, непрямой, с комплементом. Реакция Кунса является методом экспресс- диагностики для выявления антигенов микробов или определения антител.

2) Иммуноферментный анализ (ИФА)_ - выявление антигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом- меткой.

После соединения антигена с меченой ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат и хромоген. Субстрат расщепляется ферментом и его продукты деградации вызывают химическую модификацию хромогена. При этом хромоген меняет свой цвет- интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител. Наиболее распространен метод твердофазный ИФА, когда один из компонентов реакции (антиген или антитела) сорбирован на твердом носителе, например, в лунках микропанелей из полистирола. ИФА применяют для диагностики вирусных, бактериальных и паразитарных болезней, для определения гормонов, ферментов, лекарственных препаратов и других биологически активных веществ, содержащихся в исследуемом материале в очень небольших количествах.

3) Радиоиммунологический анализ (РИА)_ высокочувствительный метод, основанный на реакции антиген- антитело с применением антигенов или антител, меченых радионуклидом.

РИА применяют для выявления антигенов микробов, определения гормонов, ферментов, лекарственных препаратов и других биологически активных веществ, содержащихся в исследуемом материале в очень небольших количествах.

4) Иммуноблоттинг- высокочувствительный метод, основанный на сочетании электрофореза и ИФА или РИА. Используют для диагностики ВИЧ и других инфекций.